目的本研究旨在構建人FcγRIIb基因的真核表達重組質粒pEGFP-FcγRIIb,并檢測其在真核細胞NIH3T3及BALB/c小鼠體內的表達,為后續(xù)的體內研究奠定基礎。方法提取U937細胞的總RNA,采用RT-PCR法擴增人FcγRIIb基因編碼區(qū)片段。用限制性內切酶HindⅢ和SmaⅠ雙酶切空質粒pEGFP-C1獲得線性化質粒。將擴增出的目的片段與線性質粒pEGFP-C1連接,構建重組表達質粒pEGFP-FcγRIIb,經PCR、限制性核酸內切酶酶切及DNA測序鑒定后,采用脂質體法將重組表達質粒pEGFP-FcγRIIb轉染到真核細胞NIH3T3中,同時設空質粒pEGFP-C1和細胞對照組,用熒光顯微鏡觀察細胞瞬時表達。經G418篩選3W,熒光顯微鏡下觀察陽性細胞約為80%時,提取細胞的總蛋白,用Western blot方法進一步鑒定人的FcγRIIB的表達情況。將重組質粒pEGFP-FcγRIIb注射到BALB/c小鼠肌肉中,并設空質粒pEGFP-C1和PBS對照組。三組小鼠分別注射pEGFP-FcγRIIb（50μg）、pEGFP-C1（50μg）及PBS（50μL）,2w后以... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

質粒pEGFP-C1的物理圖譜

FcγRIIb基因PCR擴增產物電泳結果

pEGFP-FcγRIIb正向測序的結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]FcγRⅡ b調控漿細胞的存活和凋亡[J]. 王勇.  國際免疫學雜志. 2007 (05)

碩士論文
[1]FcγRⅡB在重癥肌無力中的表達及其與抗AChR抗體的關系[D]. 翦愛.中南大學 2009



本文編號：3120104