[目的]葡糖基轉(zhuǎn)移酶GtfB為致齲菌變形鏈球菌的胞外抗原,羧基端葡聚糖結(jié)合區(qū)Glu為GtfB所包含的功能區(qū)之一。本研究中的Glu-FTH為Glu與鐵蛋白（ferritin,FTH）融合表達(dá)、自組裝所形成的納米粒子防齲多肽疫苗。通過(guò)大腸桿菌蛋白表達(dá)系統(tǒng)提取融合蛋白Glu-FTH,應(yīng)用鎳柱親和層析技術(shù)純化Glu-FTH。觀察防齲疫苗Glu-FTH對(duì)樹突狀細(xì)胞（dendritic cells,DCs）的活化作用,以及DC對(duì)Glu-FTH的攝取作用。評(píng)價(jià)Glu-FTH的黏膜免疫反應(yīng)和齲齒保護(hù)作用,探索FTH對(duì)防齲疫苗黏膜免疫反應(yīng)水平和類型的影響。[方法]應(yīng)用鎳柱親和層析技術(shù)純化融合蛋白Glu-FTH,根據(jù)SDS-PAGE分析純化條件。依據(jù)western blot技術(shù)驗(yàn)證蛋白純化的結(jié)果。隨后通過(guò)透射電鏡觀察Glu-FTH的形態(tài)并分析其粒徑分布。將6周BALB/c小鼠隨機(jī)分為5組,即Glu-FTH、Glu、FTH、Glu+Poly（I:C）、PBS組。經(jīng)滴鼻途徑免疫小鼠,首次免疫（第0周）后,于第2、4周加強(qiáng)免疫。第0、2、4、6、8、10、12、16、20周,收集血清、唾液。ELISA檢測(cè)血清中... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１蛋白Ｇｌｕ－ＦＴＨ自組裝示意圖??

保持流速為１０滴／分鐘，收集穿流液。??保存：向柱內(nèi)加５倍柱體積的１％脫氧膽酸鈉除殘留內(nèi)毒素。向柱內(nèi)加２５％乙醇，于４°Ｃ保試劑生物科技股份有限公司檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果??粒ｐＥＴ２８ａ?（＋）?－Ｇｌｕ－ＦＴＨ的鑒定??２８ａ（＋）－Ｇｌｕ－ＦＴＨ由本組前期構(gòu)建，在將其切酶酶切對(duì)該表達(dá)載體進(jìn)行鑒定。重組質(zhì)粒雙酶后，產(chǎn)生兩個(gè)大小分別為１４６４ｂｐ、２７１０段、質(zhì)粒ｐＥＴ２８ａ的預(yù)測(cè)值相符。質(zhì)粒測(cè)序－Ｇｌｕ－ＦＴＨ?（圖?３－１）。??Ｍａｒｋｅｒ?１?２??

自組裝納米粒子鐵蛋白增強(qiáng)防鋪疫苗黏膜免疫反應(yīng)??蛋白，其中２００ｍＭ和５００ｒａＭ咪唑可洗脫目的蛋白，其分子量約為２１ｋＤａｊｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ也對(duì)三種目的蛋白進(jìn)行了驗(yàn)證（圖３－２）。本實(shí)驗(yàn)的蛋白提取、純化效果較??好。??Ａ?１２?３?４?Ｓ?６?７?Ｂ?Ｍ?＇?？?Ｉ?／??１知???９＾?—?咿，??７２?—?｜Ｋ?，？額ｇｇｗｙ???ｃ．ｈ?ｔｔｈ??—著鑛＇?爾?—??羞—＾?二．二—?Ｗｔｋ?＾?－ｍｍ?＾ｍＫｍＪＳＢｋ?Ｗｔ￣＾－??ｐ?Ｍａｒｋｅｒ?Ｉ?２?３??Ｌ?４?Ｄ?Ｊ２０?ＨＰ，ｗｊ??＝＇＊?８５??扣?一?６０?＿?？??；?霉．．＿Ｔ?４，１??ｍｍｍ??圖３－２重組蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??Ａ．?１？７依次為：Ｇｌｕ－ＦＴＨ加ＩＰＴＧ培養(yǎng)（ＩＰＴＧ＋）的超聲裂解后上清，未??加ＩＰＴＧ培養(yǎng)（ＩＰＴＧ－）的超聲裂解后上清，上清穿流液（ＩＰＴＧ＋），ｌＯｒａＭ，２０禮，??６０ｍＭ


本文編號(hào)：3091085