本文關(guān)鍵詞：抗結(jié)核新型化合物的篩選、初步評(píng)價(jià)及表面展示SIV Gag抗原的重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核病(Tuberculosis, TB)是全球危害最大的傳染病之一。耐藥TB的出現(xiàn)及TB與艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)共感染使人類對(duì)抗TB新藥的需求更為迫切。然而傳統(tǒng)的抗TB藥物研發(fā)模式所需周期長(zhǎng)、成本高,在長(zhǎng)達(dá)40多年的時(shí)間里,沒有抗TB新藥誕生。本實(shí)驗(yàn)利用新型的抗TB藥物篩選模型,成功的篩選到一種化合物(5k),在體內(nèi)和體外的評(píng)價(jià)中都表現(xiàn)出良好的殺菌活性。利用該模型,可以在體內(nèi)外連續(xù)檢測(cè)同一樣品,實(shí)驗(yàn)過程中不需要添加任何底物,僅需3-5天便可以對(duì)藥物活性進(jìn)行快速評(píng)價(jià),靈敏度高,重復(fù)性強(qiáng)。在活性檢測(cè)中：使用無抗性的自主發(fā)光的H37Ra (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Ra, UAIRa)對(duì)一系列化合物進(jìn)行初篩,篩選出包括5k在內(nèi)的數(shù)十個(gè)具有體外殺菌活性的新型化合物；用無抗性自主發(fā)光的H37Rv (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Rv, UAlRv)對(duì)這些化合物的殺菌活性做進(jìn)一步驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)5k的體外殺菌效果較好；并且對(duì)于臨床耐藥菌株,5k也有較好的殺菌活性。在體內(nèi)對(duì)于藥物活性的檢測(cè)中,使用不同劑量的5k對(duì)感染UAIRa的BALB/c小鼠進(jìn)行治療,發(fā)現(xiàn)5k在體內(nèi)也表現(xiàn)出較強(qiáng)的殺菌效果,其殺菌效果與藥物劑量呈正相關(guān)性,并且沒有表現(xiàn)出體內(nèi)毒性。初步的體內(nèi)評(píng)價(jià)表明5k有希望成為抗TB新藥。自人類首次發(fā)現(xiàn)艾滋病以來,科研人員一直致力于研發(fā)一種安全有效的HIV疫苗。科研人員經(jīng)過30多年潛心研究,提出HIV疫苗需要誘發(fā)機(jī)體多重免疫反應(yīng)。這樣,疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體可以在病毒感染時(shí)中和部分病毒,其后以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的免疫反應(yīng)能夠清除被病毒感染的細(xì)胞,從而降低HIV載量,并減少HIV的傳播效率,達(dá)到預(yù)防與治療的雙重目的。近年來,由于性傳播途徑成為HIV傳播的主要方式,所以能夠誘發(fā)機(jī)體粘膜免疫反應(yīng)的分枝桿菌疫苗載體在疫苗研發(fā)中越來越受到重視。將HIV-1的Env抗原展示在恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis, Msmeg)表面,構(gòu)建HIV疫苗,檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該疫苗可以誘發(fā)機(jī)體長(zhǎng)期的粘膜免疫反應(yīng),并且抗原表達(dá)在表面的免疫效果好于抗原表達(dá)在胞內(nèi)。對(duì)HⅣ患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答和病毒載量進(jìn)行比較,可以發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)針對(duì)Gag的反應(yīng)更強(qiáng)時(shí),病毒載量才會(huì)下降�；谝陨铣晒�,本實(shí)驗(yàn)選擇了三種不同載體蛋白的表面展示系統(tǒng),在新型的無任何毒力的Msmeg疫苗載體的表面展示SIV Gag抗原,構(gòu)建重組菌株。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核病 篩藥模型 HIV 表面展示 疫苗
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 緒論10-20
• 1.1 結(jié)核病概述10-14
• 1.1.1 結(jié)核病10
• 1.1.2 Mtb的生物學(xué)特性10-11
• 1.1.3 Mtb的致病機(jī)制11
• 1.1.4 TB的防治11-12
• 1.1.5 耐藥TB的出現(xiàn)12-14
• 1.1.6 抗TB新藥的研發(fā)14
• 1.2 艾滋病概述14-20
• 1.2.1 艾滋病14-15
• 1.2.2 HIV的生物學(xué)特性15-16
• 1.2.3 HIV的致病機(jī)制16
• 1.2.4 HIV的治療16
• 1.2.5 HIV疫苗的研發(fā)16-17
• 1.2.6 利用重組BCG構(gòu)建HIV疫苗17-19
• 1.2.7 利用重組Msmeg構(gòu)建HIV疫苗19-20
• 第二章 抗結(jié)核新型化合物的篩選、初步評(píng)價(jià)20-29
• 2.1 引言20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 2.2.2 主要試劑和耗材21
• 2.2.3 抗生素與藥物21-22
• 2.2.4 常用培養(yǎng)基與相關(guān)溶液22
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法23-24
• 2.3.1 抗TB新型化合物活性的體外檢測(cè)23-24
• 2.3.2 抗TB新型化合物活性的體內(nèi)檢測(cè)24
• 2.4 結(jié)果與討論24-27
• 2.4.1 抗TB新型化合物體外活性的評(píng)價(jià)24-26
• 2.4.2 抗TB新型化合物體內(nèi)活性的初步評(píng)價(jià)26-27
• 2.5 小結(jié)27-29
• 第三章 表面展示SIV Gag抗原的重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建29-59
• 3.1 引言29-32
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與質(zhì)粒32
• 3.2.2 主要試劑和耗材32-33
• 3.2.3 抗生素與藥物33
• 3.2.4 常用培養(yǎng)基與相關(guān)溶液33-34
• 3.2.5 實(shí)驗(yàn)儀器34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法34-50
• 3.3.1 攜帶載體蛋白基因的質(zhì)粒構(gòu)建34-37
• 3.3.2 載體蛋白基因與hsp60啟動(dòng)子連接的質(zhì)粒構(gòu)建37-39
• 3.3.3 攜帶eGFP基因的質(zhì)粒構(gòu)建39-41
• 3.3.4 eGFP基因與載體蛋白基因連接的質(zhì)粒構(gòu)建41-42
• 3.3.5 eGFP的表面展示整合型質(zhì)粒構(gòu)建42-44
• 3.3.6 eGFP表面展示質(zhì)粒轉(zhuǎn)化ZWY244
• 3.3.7 利用熒光倒置顯微鏡驗(yàn)證eGFP的表達(dá)44-45
• 3.3.8 攜帶抗原SIV Gag基因的質(zhì)粒構(gòu)建45-47
• 3.3.9 抗原SIV Gag基因與載體蛋白基因連接的質(zhì)粒構(gòu)建47-48
• 3.3.10 抗原SIV Gag基因的表面展示整合型質(zhì)粒的構(gòu)建48-50
• 3.3.11 抗原SIV Gag轉(zhuǎn)化新型疫苗載體ZWY250
• 3.4 結(jié)果與討論50-58
• 3.4.1 用于建立和對(duì)比表面展示系統(tǒng)的質(zhì)粒的構(gòu)建50-54
• 3.4.2 表面展示的可行性驗(yàn)證54-55
• 3.4.3 表面展示SIV Gag抗原的重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建55-58
• 3.5 小結(jié)58-59
• 第四章 總結(jié)與展望59-61
• 4.1 總結(jié)59
• 4.2 展望59-61
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 附錄66-72
• 致謝72-73
• 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果73-7

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本文編號(hào)：308111