基于NF-κB信號通路rNS1/2對甲型流感病毒誘導(dǎo)小鼠β防御素4產(chǎn)生的作用及其機(jī)制研究
發(fā)布時間：2021-03-06 10:32
目的運(yùn)用基因工程方法獲得重組甲型流感病毒H1N1非結(jié)構(gòu)蛋白1（r NS1）和2（r NS2）,探討r NS1和r NS2對小鼠呼吸道組織β防御素4產(chǎn)生的作用,以及其β防御素4基于NF-κB信號通路的作用機(jī)制。方法1、運(yùn)用RT-PCR方法從甲型流感病毒株A/PR/8/34（H1N1）擴(kuò)增NS1、NS2基因,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒p ET22b（+）/NS1,p ET22b（+）/NS2,經(jīng)酶切、PCR和基因測序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta-gami（2）,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)親和層析、超濾獲得重組蛋白,通過SDS-PAGE電泳和Western Blot分析鑒定重組蛋白的正確性;2、將BALB/c小鼠隨機(jī)分為r NS1組（100μg/kg）、r NS1+病毒RNA組;r NS1+病毒組、RNA組（50μg/kg）、病毒組（0.2×LD50）、正常對照組、r NS2+病毒組、r NS2+病毒RNA組、r NS2組（100μg/kg）,共9組,每組6只,每組隨機(jī)給3只小鼠提前12h腹腔注射PDTC（50mg/kg）,再將相應(yīng)制劑通過滴鼻給予小鼠,24h后采用RT-PCR、HE染色、wes...
【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁數(shù)】：75 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
質(zhì)粒pET22b(+)模式圖
R 鑒定陽性克隆擴(kuò)增后提取質(zhì)粒，用 Apal 和 Xhol0bp、1500bp 大小的條帶（圖 1-4）。重組質(zhì)1; 2: NS2; 3:陰性對照; M: DNAmarkerS1、NS2 成熟肽基因的 PCR 產(chǎn)物the PCR product of NS1、NS2 mature peptide.
1:pET22b(+)/NS1 ; 2and3:pET22b(+) ; 4:pET22b(+)/NS2;NA marker.-4 重組質(zhì)粒 pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2 酶切鑒定 1-4 Identification of recombinant pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2注：1、NS1；2、NS2 M: DNAmarker圖 1-5 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定Fig.1-5 Identification of thepositive clone by the product of
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽流感病毒研究概述[J]. 譚偉,徐倩,謝芝勛. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(01)
[2]幽門螺桿菌雙基因多表位重組原核表達(dá)工程菌的構(gòu)建及其表達(dá)特性的研究[J]. 楊靖,潘興,歐琴,周法庭,李建春,祝捷,周永君,李明遠(yuǎn),王保寧. 成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2013(04)
[3]H5N1亞型禽流感病毒NS1基因截短體的克隆與原核表達(dá)[J]. 鄭方亮,朱春玉,商玲玲,馬杰良,孫婷婷,艾海新,朱俊峰,段艷婷,朱應(yīng),劉宏生. 微生物學(xué)雜志. 2012(03)
[4]甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究[J]. 趙宗正,涂加鋼,張文婷,胡勇,周紅波,金梅林. 中國動物傳染病學(xué)報. 2012(03)
[5]甲型流感病毒NS1蛋白應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 王巧剛,郭潮潭. 國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志. 2011 (06)
[6]H5N1亞型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表達(dá)[J]. 朱春玉,孫婷婷,鄭方亮,艾海新,朱俊峰,王寧,商玲玲,劉宏生. 遼寧大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2011(02)
[7]應(yīng)答流感病毒感染的宿主信號途徑研究進(jìn)展[J]. 代新憲,張麗姝,洪濤. 中國科學(xué):生命科學(xué). 2010(11)
[8]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合胰島移植對受體鼠樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響[J]. 李富榮,鄧春艷,王新根,齊暉,任莉莉,周漢新. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(07)
[9]人類3-磷酸甘油醛脫氫酶的原核表達(dá)、純化和鑒定[J]. 李毅,萬濤,楊琴,蔡雪飛,張文露,湯華. 生物技術(shù)通報. 2009(03)
[10]A型流感病毒NS1蛋白抑制IFN抗病毒作用的機(jī)制[J]. 史一博,孫建和. 中國人獸共患病學(xué)報. 2007(10)
本文編號：3066941
【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁數(shù)】：75 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
質(zhì)粒pET22b(+)模式圖
R 鑒定陽性克隆擴(kuò)增后提取質(zhì)粒，用 Apal 和 Xhol0bp、1500bp 大小的條帶（圖 1-4）。重組質(zhì)1; 2: NS2; 3:陰性對照; M: DNAmarkerS1、NS2 成熟肽基因的 PCR 產(chǎn)物the PCR product of NS1、NS2 mature peptide.
1:pET22b(+)/NS1 ; 2and3:pET22b(+) ; 4:pET22b(+)/NS2;NA marker.-4 重組質(zhì)粒 pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2 酶切鑒定 1-4 Identification of recombinant pET22b(+)/NS1、pET22b(+)/NS2注：1、NS1；2、NS2 M: DNAmarker圖 1-5 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定Fig.1-5 Identification of thepositive clone by the product of
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽流感病毒研究概述[J]. 譚偉,徐倩,謝芝勛. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(01)
[2]幽門螺桿菌雙基因多表位重組原核表達(dá)工程菌的構(gòu)建及其表達(dá)特性的研究[J]. 楊靖,潘興,歐琴,周法庭,李建春,祝捷,周永君,李明遠(yuǎn),王保寧. 成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2013(04)
[3]H5N1亞型禽流感病毒NS1基因截短體的克隆與原核表達(dá)[J]. 鄭方亮,朱春玉,商玲玲,馬杰良,孫婷婷,艾海新,朱俊峰,段艷婷,朱應(yīng),劉宏生. 微生物學(xué)雜志. 2012(03)
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[5]甲型流感病毒NS1蛋白應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 王巧剛,郭潮潭. 國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志. 2011 (06)
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[8]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合胰島移植對受體鼠樹突狀細(xì)胞成熟和功能的影響[J]. 李富榮,鄧春艷,王新根,齊暉,任莉莉,周漢新. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(07)
[9]人類3-磷酸甘油醛脫氫酶的原核表達(dá)、純化和鑒定[J]. 李毅,萬濤,楊琴,蔡雪飛,張文露,湯華. 生物技術(shù)通報. 2009(03)
[10]A型流感病毒NS1蛋白抑制IFN抗病毒作用的機(jī)制[J]. 史一博,孫建和. 中國人獸共患病學(xué)報. 2007(10)
本文編號：3066941
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