目的:建立同時(shí)測定糖尿病模型大鼠體內(nèi)沙格列汀及其代謝產(chǎn)物5-羥基沙格列汀血藥濃度的方法。方法:采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。色譜柱為Waters BEH Shield RP₁₈,流動(dòng)相為10 mmol/L乙酸銨-乙腈（70∶30,V/V）,流速為0.3 m L/min,柱溫為30℃,進(jìn)樣量為10μL;掃描模式為多反應(yīng)監(jiān)測,正離子模式,各離子對為m/z 316.2→180.2（沙格列汀）、m/z 332.3→196.2（5-羥基沙格列�。�、m/z 304.2→153.9（維格列汀,內(nèi)標(biāo)）。取6只SD大鼠,復(fù)制糖尿病模型后,ig沙格列汀0.53 mg/kg,于給藥前及給藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0 h經(jīng)眼眶取血0.25 m L,測定血漿中沙格列汀及其代謝物5-羥基沙格列汀的濃度,采用Win Nonlin 6.1軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果:沙格列汀和5-羥基沙格列汀的質(zhì)量濃度線性范圍為0.1¹00（r=0.997 2）、0.2²00 ng/m L（r=0.9... 

【文章來源】：中國藥房. 2017,28(16)北大核心

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【部分圖文】：

I6202姍l口時(shí)間m川

5.9％～107.8％、83.5％～88.2％（RSD均小于10.3％，n＝6）；穩(wěn)定性試驗(yàn)（室溫放置24h、－80℃和室溫下反復(fù)凍融3次、－80℃凍存90d及吹干后殘?jiān)谑覝胤胖?4h）峰面積的RSD≤11.0％（n＝5）。2.8藥動(dòng)學(xué)研究取6只大鼠，高脂飼料喂養(yǎng)1個(gè)月后，ip鏈脲佐菌素誘導(dǎo)T2DM模型。造模前禁食、自由飲水12h。按臨床上沙格列汀給藥劑量進(jìn)行換算，ig0.53mg/kg沙格列汀溶液，分別于給藥前和給藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0h經(jīng)大鼠眼眶靜脈叢取血0.25mL，置于經(jīng)抗凝處理的離心管中，3500r/min離心圖1二級碎片全掃描質(zhì)譜圖Fig1Fullscanningproductionspectraofthesecond-aryfragments4.0×1053.2×1052.4×1051.6×1058.0×1040度強(qiáng)，psc150200250300350m/zA.沙格列汀2.8×1072.4×1072.0×1071.6×1071.2×1078.0×1064.0×1060度強(qiáng)，psc60120180240300340m/zB.5-羥基沙格列汀1.00×1088.00×1076.00×1074.00×1072.00×1070度強(qiáng)，psc60120180240300340m/zC.內(nèi)標(biāo)圖2超高效液相色譜圖Fig2UPLCchromatograms400200強(qiáng)度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8時(shí)間，minA.空白血漿3.7×1042.0×104強(qiáng)度0，psc400200強(qiáng)度0，psc400200強(qiáng)度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8時(shí)間，minB.空白血漿+沙格列汀+5-羥基沙格列汀+內(nèi)標(biāo)2.0×1041.0×1040度強(qiáng)，psc3.6×1042.0×1040度強(qiáng)，psc3.0×1051.0×105強(qiáng)度0，psc0.40.81.21.62.02.42.8時(shí)間，minC.給藥0.5h后大鼠血漿樣品+內(nèi)標(biāo)3.8×1042.0×10407.4×1044.0×104

ChinaPharmacy2017Vol.28No.16中國藥房2017年第28卷第16期5min，分離血漿，置于－80℃冰箱保存，備用。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法測定不同時(shí)間點(diǎn)的沙格列汀和5-羥基沙格列汀的血藥濃度，藥-時(shí)曲線見圖3。采用WinNolin6.1軟件按照非房室模型進(jìn)行處理，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表1。3討論本文建立了穩(wěn)定性好、通用性強(qiáng)、可靈敏快速測定大鼠血漿中沙格列汀及其代謝物5-羥基沙格列汀血藥濃度的方法，并成功地應(yīng)用于大鼠藥動(dòng)學(xué)研究。本實(shí)驗(yàn)起初采用BEHC18色譜柱，使用甲醇作為流動(dòng)相，結(jié)果5-羥基沙格列汀的定量下限達(dá)不到檢測要求；在流動(dòng)相中添加乙腈后5-羥基沙格列汀的響應(yīng)值提高，但檢測物峰形變差。使用WatersBEHShieldRP18色譜柱摸索方法時(shí)流動(dòng)相水相嘗試過0.1％甲酸、0.1％甲酸-5mmol/L甲酸銨，但是隨著水相比例的增加檢測物的峰形變差且分叉成雙峰，故選擇不添加甲酸，且試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加乙酸銨比添加甲酸銨靈敏度高、響應(yīng)好，故最終選擇10mmol/L乙酸銨-乙腈作為流動(dòng)相體系。樣品處理時(shí)考慮到沙格列汀游離堿在水中微溶，在二氯甲烷及乙酸乙酯中溶解，但5-羥基沙格列汀的水溶性好，用乙酸乙酯、二氯甲烷基本無法提取，因此液液萃取同時(shí)提取兩者比較困難，常規(guī)的液液萃取處理方法不適合該血漿樣品的處理。而乙腈蛋白質(zhì)沉淀法處理血漿樣品的基質(zhì)效應(yīng)及提取回收率均滿足相關(guān)的要求[11]，故最終采用乙腈蛋白質(zhì)沉淀法預(yù)處理。綜上所述，本研究建立的方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，適用于沙格列汀及其代謝產(chǎn)物5-羥基沙格列汀在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究。參考文獻(xiàn)[1]BoultonDW.Clinicalpharmacokineticsandpharmacody-namicsofsaxagliptin，adipeptidylpeptidase-4inhibitor[J].ClinPharmacokinet，2017，56（

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3066831