目的表達(dá)、純化并鑒定抗人表皮生長因子受體3（HER3）的單鏈抗體（scFv）。方法從NCBI查找抗HER3單克隆抗體LJM716的輕鏈和重鏈序列,構(gòu)建抗HER3-scFv基因;利用畢赤酵母組成性表達(dá)載體pGAPZαA構(gòu)建重組表達(dá)載體,電轉(zhuǎn)化畢赤酵母,篩選高表達(dá)工程菌;工程菌發(fā)酵上清經(jīng)疏水層析和金屬離子親和層析純化, Western blot法和ELISA鑒定純化產(chǎn)物。結(jié)果成功構(gòu)建了抗HER3-scFv基因,獲得了高表達(dá)工程菌;發(fā)酵上清經(jīng)兩步層析純化,獲得了純度達(dá)95%以上的抗HER3-scFv,產(chǎn)率為192 mg/L; Western blot結(jié)果顯示抗HER3-scFv得到正確表達(dá), ELISA結(jié)果表明抗HER3-scFv可特異識別HER3。結(jié)論成功制備了特異的抗HER3-scFv。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

抗HER3-scFv 基因的擴(kuò)增

通過XhoⅠ和XbaⅠ兩種內(nèi)切酶分別對pGAPZαA 載體和目的基因進(jìn)行酶切, 酶切后的條帶符合預(yù)期(圖2)。連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌JMC109 大腸桿菌感受態(tài)中, 擴(kuò)增培養(yǎng)后提取質(zhì)粒。電泳結(jié)果顯示, 與pGAPZαA 空載體相比, pGAPZαA-HER3-scFv 重組載體的位置更靠近加樣孔(圖3), 表明目的基因已插入pGAPZαA 表達(dá)載體中。圖3 重組質(zhì)粒pGAPZαA-anti-HER3-scFv 電泳圖

重組質(zhì)粒pGAPZαA-anti-HER3-scFv 電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒包膜糖蛋白單鏈抗體的篩選和鑒定[J]. 張文帥,郭喜玲,遲瑩,焦永軍.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019(01)



本文編號：3026119