炎癥反應(yīng)是機(jī)體用以抵御病原微生物侵害的一種常見(jiàn)的病理過(guò)程。病原微生物感染宿主會(huì)誘發(fā)大量促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生,其中包括腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF）和白介素1（interleukin-1, IL-1）。促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生將誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB（nuclear factor κB）的激活并啟動(dòng)下游炎癥相關(guān)基因的表達(dá),從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)。TAK1是TNFa和IL-1β介導(dǎo)的NF-κB和JNK激活的重要組成部分。到目前為止已經(jīng)有很多報(bào)道證實(shí)TAK1的多聚泛素修飾能參與了TAK1-介導(dǎo)的信號(hào)通路,比如TRAF6介導(dǎo)的TAK1的K34殘基上K63-連接的多聚泛素化與TGFβ通路中TAK1的激活有關(guān)。然而,TAK1在TNFα和IL-1β信號(hào)通路中的分子調(diào)節(jié)機(jī)理還不是十分清楚。因此,我們?cè)谝粋�(gè)包含352個(gè)泛素相關(guān)酶的cDNA文庫(kù)中篩選影響TNFα和IL-1β誘導(dǎo)的NF-κB激活的基因,并最終鑒定出能夠調(diào)節(jié)NF-κB的分子TRIM8。已有許多文獻(xiàn)報(bào)道TRIM家族蛋白在調(diào)控病毒引起的免疫應(yīng)答中具有重要作用。在我們的研究中,TRIM8在過(guò)量表達(dá)時(shí)可顯著上調(diào)由TNFα和IL... 

【文章來(lái)源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 研究背景
    1.1 炎癥反應(yīng)及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.1.1 炎癥反應(yīng)
        1.1.2 促炎細(xì)胞因子TNF及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.1.3 促炎細(xì)胞因子IL-1及其調(diào)節(jié)機(jī)理
    1.2 NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.1 NF-κB家族蛋白及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.2 IκB家族蛋白及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.3 IKK家族蛋白及其調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.4 NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)機(jī)理
            1.2.4.1 TNFR介導(dǎo)的經(jīng)典N(xiāo)F-κB通路
            1.2.4.2 TLR/IL-1R介導(dǎo)的經(jīng)典N(xiāo)F-κB通路
            1.2.4.3 TRAF2/6介導(dǎo)的IKK活化
            1.2.4.4 TAK1及其介導(dǎo)的IKK和JNK活化
            1.2.4.5 非經(jīng)典N(xiāo)F-κB通路調(diào)節(jié)機(jī)理
        1.2.5 泛素及其在NF-κB通路中的調(diào)控機(jī)理
    1.3 TRIM家族在炎癥反應(yīng)中的調(diào)控機(jī)理
2 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系、細(xì)胞培養(yǎng)材料和病毒來(lái)源
        2.1.2 細(xì)胞因子
        2.1.3 表達(dá)載體
        2.1.4 抗體
        2.1.5 核酸操作及檢測(cè)試劑盒
        2.1.6 特殊儀器和設(shè)備
        2.1.7 其它試劑
        2.1.8 其它耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.2.2 表達(dá)載體構(gòu)建和質(zhì)粒純化
        2.2.3 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.4 抗體制備
        2.2.5 免疫共沉淀和Western Blot檢測(cè)
        2.2.6 泛素化實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 實(shí)時(shí)定量熒光PCR
        2.2.8 建立穩(wěn)定細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 研究背景與立項(xiàng)依據(jù)
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.2.1 過(guò)量表達(dá)TRIM8正調(diào)控TNFα和IL-1β信號(hào)通路
        3.2.2 下調(diào)TRIM8基因的表達(dá)抑制NF-κB的激活
        3.2.3 TRIM8突變體抑制TAK1介導(dǎo)的NF-κB的激活
        3.2.4 TRIM8與TAK1具有相互作用
        3.2.5 TRIM8增強(qiáng)TAK1的多聚泛素化
        3.2.6 下調(diào)TRIM8基因表達(dá)減弱TAK1的K63-連接多聚泛素化
        3.2.7 下調(diào)TRIM8基因表達(dá)減弱由TNFα和IL-1β誘導(dǎo)的TAK1、IKKα/β以及IκBα的磷酸化
        3.2.8 下調(diào)TRIM8表達(dá)抑制IκBα的降解
        3.2.9 TRIM8增強(qiáng)TNFα和IL-β介導(dǎo)的AP1的激活
    3.3 實(shí)驗(yàn)討論與展望
參考文獻(xiàn)
縮略詞表
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3024727