目的 確定問號鉤端螺旋體賴株基因組編碼的溶血素Sph2、TlyA、HlpA裂解紅細胞釋放出游離狀態(tài)亞鐵血紅素（heme）,heme誘導(dǎo)巨噬細胞產(chǎn)生炎癥因子,從而加深了解鉤體溶血素在鉤體致病過程中的作用,進一步闡明鉤體的致病機制。方法 （1）T-A克隆鉤體溶血素Sph2、TlyA、HlpA的編碼基因片段sph2、tlyA、hlpA,構(gòu)建以上各基因的原核表達系統(tǒng),純化各目的蛋白并測定各重組表達蛋白濃度;（2）采用血平板溶血圈及分光光度法檢測重組表達蛋白的溶血活性;（3）應(yīng)用分光光度法定量測定重組表達蛋白裂解2%綿羊血紅細胞懸液后釋放的heme;（4）采用Real-timePCR檢測NF-κB、p38MAPK或JNK信號通路阻斷前后heme刺激人THP-1和小鼠J774A.1巨噬細胞產(chǎn)生炎癥因子IL-6、IL-18、IL-33、IL-1β、TNF-α MCP-1、IL-8（人）、KC（小鼠）的 mRNA 水平變化。結(jié)果 成功構(gòu)建目的基因sph2、tlyA、hlpA的原核表達系統(tǒng),得到具有溶血活性的各重組溶血素蛋白;rSph2、rTlyA、rHlpA均能夠引起綿羊紅細胞裂解并釋放出heme;h... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４．２目的基因切／ｚ２、Ｗ＃、的ｄ的ＰＣＲ基因片段瓊脂糖電泳圖

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本文編號：3004873