第一部分人源化小鼠模型的建立及用該模型進行基因治療研究的初步探索背景:人源化小鼠模型廣泛用于人體生理病理機制研究、藥物臨床療效的評估。經(jīng)過近三十年的發(fā)展,人源化小鼠模型日益成熟。IL2rg和prkdc/rag基因突變的新型免疫缺陷老鼠缺乏T、B、NK細胞,是目前應(yīng)用最多的人源化小鼠模型。基因治療是原發(fā)性免疫缺陷病患兒無條件進行移植時的首選治療,其臨床應(yīng)用前需要在體外和和人源化小鼠體內(nèi)進行安全性和有效性的臨床前評估。方法:收集幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎患兒廢棄骨髓標(biāo)本,磁珠分選CD34+細胞。輻照8-9周齡NOD-Prkdc^scid Il2rg^null（NPG）雌性小鼠,4小時后通過尾靜脈移植入1-5×10⁵個CD34+細胞進行人免疫系統(tǒng)重建。移植后4周開始尾靜脈取血流式細胞術(shù)檢測人CD45細胞植入情況,移植后12-14周處死小鼠,流式細胞術(shù)分析各免疫器官細胞亞群,組織切片觀察脾臟、胸腺形態(tài)。利用GFP慢病毒轉(zhuǎn)染CD34+細胞,完成轉(zhuǎn)染后流式細胞術(shù)分析轉(zhuǎn)染效率,集落形成試驗,移植入NPG小鼠體內(nèi)觀察細胞分化。結(jié)果:磁珠分選CD34+... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

骨髓CD34+細胞分選后細胞亞群分析

圖 1.3 NPG 小鼠 CFigure 1.3 Percentage and subsets of h用骨髓來源的 CD34+干細胞移植老重建，占外周血白細胞的 2.81%±2.27%合率明顯上升（17.95%±15.01%，n=9）之間，之后一直維持在這一水平，無明顯分析外周血人 CD45+細胞組成，發(fā)現(xiàn) CD（91.67%±8.36%，n=9）。CD3+T 細胞在n=9），最后逐漸下降至 0.58%±0.36%10.12%-29.75%，CD56+NK 細胞則在 3.112 周，各個免疫器官嵌合情況分析發(fā)現(xiàn)且骨髓脾臟均以 CD19+B 細胞為主，無

CD5IgM CD10CD20圖 1.6 NPG 小鼠不同部位 CD19+B 細胞發(fā)育標(biāo)志Figure 1.6 Developmental markers on human CD19+ cells.分析 CD19+細胞表面標(biāo)志，發(fā)現(xiàn)外周以 CD19+CD5+B1 細胞為主，在不表達。而 B 細胞成熟標(biāo)志 IgM、CD20 在外周血最高，骨髓最低，細志 CD10 在骨髓中高達 90%以上，在外周血和脾臟也高表達。這與上CD38hi未成熟 B 細胞在脾臟中有不尋常的累積相一致。小鼠脾臟前體 B 細胞的積累1.108.9


本文編號：3003835