目的:提取并鑒定人尿源干細胞來源的外泌體（h USCs-Exo）。方法:利用改良的尿液收集裝置收集健康成年男性新鮮尿液,采用“一次離心法”從尿液中分離得到人尿源干細胞（h USCs）,對其進行培養(yǎng),傳代;通過CCK-8法繪制其生長曲線,流式細胞術(shù)鑒定其表面標記物,體外定向誘導(dǎo)其向成骨細胞、脂肪細胞分化,分別采用茜素紅、Von Kossa和油紅O染色進行鑒定;采用改良超高速離心法從h USCs培養(yǎng)上清中提取h USCs-Exo,透射電鏡分析其形態(tài)、NTA法分析其大小及濃度,蛋白質(zhì)免疫印跡法（WB）檢測其特異性蛋白CD9、CD63和HSP70的表達。結(jié)果:h USCs培養(yǎng)3-5天后開始貼壁生長,細胞在原代時呈“鋪路石”樣,在第一代和第二代時呈“米�！睒�,傳至第三代后逐漸呈“紡錘形”或“梭形”;經(jīng)CCK-8法測定h USCs呈現(xiàn)典型的“S”形生長曲線;流式細胞技術(shù)顯示:h USCs陽性表達間充質(zhì)干細胞特異的表面標志物CD44、CD73、CD90和CD105,不表達CD19、CD34、C D45CD11b和HLA-DR,表明h USCs符合間充質(zhì)干細胞的特征;同時h USCs在體外經(jīng)成骨、成脂... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人尿源干細胞P0-P8細胞形態(tài)學(xué)變化（×100）

圖2 hUSCs生長曲線Figure 2 Cell proliferation curve of hUSCs面標志物s具有代表性的幾種表面分子對第3代hUSCs進行流式細表達的CD44、CD73、CD90和CD105在hUSCs同樣表達表達的CD19、CD34 、CD45 、CD11b和HLA-DR在。該實驗結(jié)果表明hUSCs表達國際上公認的MSCs表面

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 李超然20圖3 流式細胞術(shù)檢測第3 代人尿源干細胞的表面抗原Figure 3 Surface antigen expression of the 3rd generation of human urine-derived stem cells byflow cytometry圖注：a為CD44、b為CD73、c為CD90、d為CD105；e為CD19、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR

【參考文獻】：
期刊論文
[1]尿源性干細胞外泌體對移動性牙根吸收修復(fù)的影響及其作用機制[J]. 顧磊,戴紅衛(wèi),周雯雯,周建萍.  廣西醫(yī)學(xué). 2020(22)



本文編號：3002258