目的探討MRP8/MRP14誘導小鼠腹腔巨噬細胞細胞因子表達效應及其作用機制。方法 Luminex x MAP液相芯片系統(tǒng)檢測重組MRP8/MRP14蛋白誘導腹腔巨噬細胞6種細胞因子/趨化因子的水平變化;MRP14不同結構域融合蛋白刺激細胞,檢測TNF-α、IP-10和IL-6表達;Western blot檢測MRP8/MRP14刺激細胞p38 MAPK、JNK和ERK激酶磷酸化變化;細胞預先用p38 MAPKs、JNK、ERK激酶抑制劑、TLR4和RAGE受體拮抗劑預處理,之后給予MRP8/MRP14蛋白刺激,檢測TNF-α、IP-10和IL-6表達。結果 MRP8/MRP14能顯著誘導TNF-α、IP-10和IL-6的表達,與對照組相比,蛋白表達水平分別升高約98.2、378.6和6.3倍（P<0.01）,MRP8/MRP14不能誘導IL-2、IL-5和IFN-g的表達;MRP14全長及其結構域EFhand-1、EFhand-2及EFhand-1+2融合蛋白能夠誘導TNF-α、IP-10和IL-6的表達（P<0.01）,CT末端結構域不具有誘導活性;MRP8/MRP14... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學學報. 2017,37(09)北大核心

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 動物和菌株
    1.2 主要試劑
    1.3 主要方法
        1.3.1 重組蛋白的制備
        1.3.2 小鼠腹腔巨噬細胞 （PMs） 的分離、培養(yǎng)
        1.3.3細胞培養(yǎng)上清細胞因子含量測定
        1.3.4 MRP14不同結構域誘導巨噬細胞細胞因子表達的效應
        1.3.5 Western blot檢測
        1.3.6 p38 MAPK、JNK和ERK抑制劑對MRP8/MRP14誘導細胞因子表達的影響
        1.3.7 TLR4和RAGE受體抑制劑對MRP8/MRP14誘導細胞因子表達的影響
        1.3.8 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 MRP8/MRP14誘導小鼠腹腔巨噬細胞細胞因子的表達
    2.2 MRP蛋白以包含有鈣結合手型 （EF-hand） 的結構域具有誘導細胞因子表達的活性
    2.3 MRP8/MRP14刺激小鼠腹腔巨噬細胞p38 MAPK、JNK及ERK激酶的磷酸化變化
    2.4 p38 MAPK、JNK和ERK激酶抑制劑對MRP8/MRP14誘導細胞因子表達的影響
    2.5 TLR4和RAGE受體拮抗劑對MRP8/MRP14誘導細胞因子表達的影響
3 討論



本文編號：3001596