發(fā)布時(shí)間：2021-01-26 13:44

　　惡性瘧原蟲PfMAg-1蛋白表達(dá)于惡性瘧原蟲裂殖子表面,該蛋白不存在于感染人類的其它4類瘧原蟲中。本實(shí)驗(yàn)室前期分別表達(dá)PfMAg-1對(duì)N、C和中段抗原蛋白后免疫新西蘭兔,取抗血清進(jìn)行體外培養(yǎng)條件下的瘧原蟲生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn),均證實(shí)抗PfMAg-1部分片段的特異性抗體對(duì)惡性瘧原蟲生長(zhǎng)有抑制作用。為進(jìn)一步觀察PfMAg-1全蛋白的功能,本研究采用規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)及相關(guān)失活蛋白（Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPR-associated protein 9,CRISPR/dCas9）技術(shù),構(gòu)建惡性瘧原蟲PfMAg-1低表達(dá)及過表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染惡性瘧原蟲后分別篩選出惡性瘧原蟲低表達(dá)株（MAg1-KD）蟲株及過表達(dá)蟲株（MAg1-OE）。經(jīng)PCR、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PfMAg-1的表達(dá)水平。并在體外培養(yǎng)條件下觀察MAg1-KD蟲株與MAg1-OE蟲株生長(zhǎng)趨勢(shì)及裂殖子入侵效率。研究結(jié)果表明,1)惡性瘧原蟲MAg1-KD蟲株較對(duì)照蟲株的體外生長(zhǎng)率顯著降低,進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＣＲ�。樱校遥洌茫幔螅辜夹g(shù)調(diào)控惡性瘧原蟲基因原理示意圖［３０］??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９介導(dǎo)的敲除技術(shù)已經(jīng)在惡性瘧原蟲中得到很好的確立，但是在該??

圖２條件性降解目的蛋白原理示意圖［２６］??

特異條帶在瓊脂糖凝膠電泳１５００ｂｐ／１１４００ｂｐ位置，與理論長(zhǎng)度一致，進(jìn)一??步測(cè)序結(jié)果表明，ｓｇＲＮＡ連入載體正確位置，說明ＭＡｇｌ－ＫＤ質(zhì)粒構(gòu)建成??功（圖３）。??１００００ｊ??３０００＾＾＾＾?／?參：爲(wèi)??１５００Ｈ??１Ｑ〇〇ｉ—Ｍ?＇??ＳＯＤ??圖３敲低質(zhì)粒ＭＡｇｌ－ＫＤ雙酶切鑒定??Ｍ?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?１?ＭＡｇｌ－ＫＤ?質(zhì)粒雙酶切??＊轉(zhuǎn)染蟲株和鑒定??利用ＰＣＲ檢測(cè)轉(zhuǎn)染蟲株內(nèi)的藥物篩選基因ＢＳＤ，包括Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ蟲株與??ＭＡｇｌ－ＫＤ蟲株。結(jié)果顯示，在ＰＣＲ成功擴(kuò)增到ＢＳＤ基因，其特異條帶在瓊脂糖??凝膠電泳３９９ｂｐ位置，與理論長(zhǎng)度一致，進(jìn)一步測(cè)序結(jié)果表明，序列與ＢＳＤ編碼??序列完全相符，說明Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ質(zhì)粒和ＭＡｇｌ－ＫＤ質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入惡性瘧原蟲３Ｄ７??蟲株內(nèi)（圖４Ａ）。為了檢測(cè)；？＞嘆－７基因ｍＲＮＡ表達(dá)是否受到調(diào)控，通過ｑＲＴ－ＰＣＲ??檢測(cè)；＾ｆｌｇ－ｉ基因的轉(zhuǎn)錄水平。與Ｃｏｎｔｒｏｌ蟲株相比，ＭＡｇｌ－ＫＤ蟲株轉(zhuǎn)錄水平降低??了?６５．３２％，表達(dá)水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]惡性瘧原蟲候選抗原PfMAg-1的免疫保護(hù)效果評(píng)價(jià)[D]. 高宇輝.中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3001217