惡性瘧原蟲PfMAg-1蛋白表達于惡性瘧原蟲裂殖子表面,該蛋白不存在于感染人類的其它4類瘧原蟲中。本實驗室前期分別表達PfMAg-1對N、C和中段抗原蛋白后免疫新西蘭兔,取抗血清進行體外培養(yǎng)條件下的瘧原蟲生長抑制實驗,均證實抗PfMAg-1部分片段的特異性抗體對惡性瘧原蟲生長有抑制作用。為進一步觀察PfMAg-1全蛋白的功能,本研究采用規(guī)律成簇間隔短回文重復及相關失活蛋白（Clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/dead CRISPR-associated protein 9,CRISPR/dCas9）技術,構建惡性瘧原蟲PfMAg-1低表達及過表達質粒,轉染惡性瘧原蟲后分別篩選出惡性瘧原蟲低表達株（MAg1-KD）蟲株及過表達蟲株（MAg1-OE）。經(jīng)PCR、實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）實驗檢測PfMAg-1的表達水平。并在體外培養(yǎng)條件下觀察MAg1-KD蟲株與MAg1-OE蟲株生長趨勢及裂殖子入侵效率。研究結果表明,1)惡性瘧原蟲MAg1-KD蟲株較對照蟲株的體外生長率顯著降低,進一步實驗... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＣＲ�。樱校遥洌茫幔螅辜夹g調控惡性瘧原蟲基因原理示意圖［３０］??ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９介導的敲除技術已經(jīng)在惡性瘧原蟲中得到很好的確立，但是在該??

圖２條件性降解目的蛋白原理示意圖［２６］??

特異條帶在瓊脂糖凝膠電泳１５００ｂｐ／１１４００ｂｐ位置，與理論長度一致，進一??步測序結果表明，ｓｇＲＮＡ連入載體正確位置，說明ＭＡｇｌ－ＫＤ質粒構建成??功（圖３）。??１００００ｊ??３０００＾＾＾＾?／?參：爲??１５００Ｈ??１Ｑ〇〇ｉ—Ｍ?＇??ＳＯＤ??圖３敲低質粒ＭＡｇｌ－ＫＤ雙酶切鑒定??Ｍ?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?１?ＭＡｇｌ－ＫＤ?質粒雙酶切??＊轉染蟲株和鑒定??利用ＰＣＲ檢測轉染蟲株內的藥物篩選基因ＢＳＤ，包括Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ蟲株與??ＭＡｇｌ－ＫＤ蟲株。結果顯示，在ＰＣＲ成功擴增到ＢＳＤ基因，其特異條帶在瓊脂糖??凝膠電泳３９９ｂｐ位置，與理論長度一致，進一步測序結果表明，序列與ＢＳＤ編碼??序列完全相符，說明Ｃｏｎｔｒｏｌ－ＫＤ質粒和ＭＡｇｌ－ＫＤ質粒成功轉入惡性瘧原蟲３Ｄ７??蟲株內（圖４Ａ）。為了檢測；？＞嘆－７基因ｍＲＮＡ表達是否受到調控，通過ｑＲＴ－ＰＣＲ??檢測；＾ｆｌｇ－ｉ基因的轉錄水平。與Ｃｏｎｔｒｏｌ蟲株相比，ＭＡｇｌ－ＫＤ蟲株轉錄水平降低??了?６５．３２％，表達水平具有統(tǒng)計學差異

【參考文獻】：
博士論文
[1]惡性瘧原蟲候選抗原PfMAg-1的免疫保護效果評價[D]. 高宇輝.中國協(xié)和醫(yī)科大學 2007



本文編號：3001217