[目的]檢測(cè)布魯氏菌BMEII0988基因的原核表達(dá)情況并對(duì)其免疫原性進(jìn)行分析。[方法]以熱滅活的布魯氏菌16M標(biāo)準(zhǔn)株為模板,根據(jù)Gen Bank中公布的羊種布魯氏菌16M的BMEII0988基因序列分別設(shè)計(jì)引物,用PCR方法擴(kuò)增BMEII0988基因的編碼序列,連接到T載體測(cè)序,將測(cè)序正確的基因序列克隆到原核表達(dá)載體p ET-32a上,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DE3感受態(tài)細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá),將獲得的目標(biāo)蛋白用AKTAxpress智能多維純化系統(tǒng)進(jìn)行純化,并用Western Blot分析其反應(yīng)原性。[結(jié)果]BMEII0988基因長(zhǎng)度為1 131 bp,編碼377個(gè)氨基酸,SDS-PAGE表明BMEII 0988融合蛋白在大約66 k Da處出現(xiàn)條帶,純化后條帶單一,BMEII 0988蛋白（NCBI標(biāo)準(zhǔn)序列號(hào):WP₀02966326.1）具有較好的反應(yīng)原性。[結(jié)論]該研究為下一步建立相應(yīng)蛋白標(biāo)記的診斷方法和疫苗的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù). 2017,27(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
    1.2 方法
        1.2.1 BMEII0988基因的擴(kuò)增
        1.2.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        1.2.3 BMEII 0988蛋白的表達(dá)
        1.2.4 重組蛋白BMEII 0988的純化及Western Blot分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因的擴(kuò)增
    2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    2.3 BMEII 0988蛋白的表達(dá)
    2.4 融合蛋白BMEII 0988的純化及Western Blot分析
3 討論
4 結(jié)論



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