銅綠假單胞菌毒性噬菌體PA-YS35的分離鑒定及全基因組序列分析
發(fā)布時(shí)間：2021-01-15 01:47
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是革蘭陰性非發(fā)酵需氧菌,普遍分布于泥土,生活用水及醫(yī)院與工業(yè)廢水中。作為引起傷口化膿性感染的主要致病菌之一,在機(jī)體免疫功能降低時(shí),會(huì)引發(fā)多種疾病,如術(shù)后引起傷口感染,同時(shí)也可引發(fā)膿腫、褥瘡、化膿性中耳炎等疾病。隨著多重耐藥性的菌株不斷地更新?lián)Q代并生成新的生物膜,臨床治療的難度進(jìn)一步增大。噬菌體作為生物型治劑,重新走入人們的視線。噬菌體是一種浸染細(xì)菌的病毒,其遍及自然界各處。隨著耐藥性細(xì)菌變異速度的加快,噬菌體療法（Phage Therapy）引起了科研學(xué)者們的興趣及一些科研機(jī)構(gòu)的重視。本實(shí)驗(yàn)臨床分離得到宿主菌后,采用傳統(tǒng)的雙層瓊脂噬斑法在吉大一院醫(yī)院廢水中分離得到毒性噬菌體,并將其命名為PA-YS35。電鏡觀察顯示,噬菌體PA-YS35屬于有尾噬菌體目（Caudovirales Order）、肌尾病毒科（Myoviridae family）噬菌體。生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn):（1）PA-YS35頭部呈立體對(duì)稱、直徑約45nm,尾部和頭部長(zhǎng)度相仿、約為45-50nm;（2）PA-YS35的基因組為雙鏈DNA,限制性內(nèi)切酶圖譜分析表明,基...
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
基于16SrDNA序列的進(jìn)化樹
圖 2.1 基于 16S rDNA 序列的進(jìn)化樹。Fig 2.1 Evolutionary tree based on the 16S rDNA sequence銅綠假單胞菌噬菌體的分離純化及滴度測(cè)定銅綠假單胞菌 YS35 為宿主菌，噬菌體來源于吉大一院廢水，如圖噬斑形態(tài)均為圓形，噬菌體 PA-YS35 可在菌苔上形成噬斑。由圖可噬斑變大，并形態(tài)單一，更加的清晰透亮。
Fig 2.2 The plaques of Pseudomonas aeruginosa bacteriophages(Figure Ashows the pre-purification plaques,Figure B shows the plaques after the firstpurification,Figure C is the plaque after the second purification,Figure D showthe plaques after the third purification)2.3.3 噬菌體透射電子顯微鏡觀察選取噬菌體 PA-YS35，采用負(fù)染法通過透射電子顯微鏡觀察得到噬菌體的圖像，如圖 2.3 所示，噬菌體由一個(gè)立體對(duì)稱的頭部和一條尾巴組成，圖 A、B 為噬菌體 PA-YS35，其頭部直徑約 45-50nm，有一條尾約 50nm。根據(jù)國(guó)際上對(duì)噬菌體的最新分類方法，噬菌體 PA-YS35 屬于有尾噬菌體目（Caudovirales Order）肌尾病毒科（Myoviridae family）噬菌體。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2014—2017年天津市兒童醫(yī)院銅綠假單胞菌的分布及耐藥性分析[J]. 陳朝暉,孫燕燕,肖亞男. 現(xiàn)代藥物與臨床. 2018(01)
[2]抗菌“新希望”——噬菌體療法的潛在風(fēng)險(xiǎn)及解決辦法探索[J]. 吳毓飛. 中國(guó)高新科技. 2017(10)
[3]青枯菌特異性噬菌體的研究進(jìn)展與應(yīng)用[J]. 蔡劉體,汪漢成,袁賽飛,劉艷霞,石俊雄. 生物技術(shù)通訊. 2012(06)
[4]全國(guó)醫(yī)院感染監(jiān)控網(wǎng)醫(yī)院感染病原菌分布及變化趨勢(shì)[J]. 文細(xì)毛,任南,吳安華,徐秀華. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2011(02)
[5]噬菌體治療研究進(jìn)展[J]. 王盛,童貽剛. 微生物學(xué)通報(bào). 2009(07)
[6]3種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌5年的分離率及耐藥趨勢(shì)回顧[J]. 許宏濤,宣天芝,陶鳳榮,張秀珍. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2004(03)
[7]多藥耐藥銅綠假單胞菌院內(nèi)感染危險(xiǎn)因素及預(yù)后因素分析[J]. 曹彬,王輝,朱元玨,陳民鈞. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2004(01)
碩士論文
[1]屎腸球菌裂解性噬菌體Ec-ZZ2全基因序列的初步分析[D]. 鄭輝.吉林大學(xué) 2017
[2]鮑曼不動(dòng)桿菌裂解性噬菌體LZ35的分離鑒定和全基因組序列分析[D]. 郭鐘賀.吉林大學(xué) 2017
[3]銅綠假單胞菌PA2800在耐藥性和致病性中的作用研究[D]. 魏金花.西北大學(xué) 2010
本文編號(hào)：2977975
【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
基于16SrDNA序列的進(jìn)化樹
圖 2.1 基于 16S rDNA 序列的進(jìn)化樹。Fig 2.1 Evolutionary tree based on the 16S rDNA sequence銅綠假單胞菌噬菌體的分離純化及滴度測(cè)定銅綠假單胞菌 YS35 為宿主菌，噬菌體來源于吉大一院廢水，如圖噬斑形態(tài)均為圓形，噬菌體 PA-YS35 可在菌苔上形成噬斑。由圖可噬斑變大，并形態(tài)單一，更加的清晰透亮。
Fig 2.2 The plaques of Pseudomonas aeruginosa bacteriophages(Figure Ashows the pre-purification plaques,Figure B shows the plaques after the firstpurification,Figure C is the plaque after the second purification,Figure D showthe plaques after the third purification)2.3.3 噬菌體透射電子顯微鏡觀察選取噬菌體 PA-YS35，采用負(fù)染法通過透射電子顯微鏡觀察得到噬菌體的圖像，如圖 2.3 所示，噬菌體由一個(gè)立體對(duì)稱的頭部和一條尾巴組成，圖 A、B 為噬菌體 PA-YS35，其頭部直徑約 45-50nm，有一條尾約 50nm。根據(jù)國(guó)際上對(duì)噬菌體的最新分類方法，噬菌體 PA-YS35 屬于有尾噬菌體目（Caudovirales Order）肌尾病毒科（Myoviridae family）噬菌體。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2014—2017年天津市兒童醫(yī)院銅綠假單胞菌的分布及耐藥性分析[J]. 陳朝暉,孫燕燕,肖亞男. 現(xiàn)代藥物與臨床. 2018(01)
[2]抗菌“新希望”——噬菌體療法的潛在風(fēng)險(xiǎn)及解決辦法探索[J]. 吳毓飛. 中國(guó)高新科技. 2017(10)
[3]青枯菌特異性噬菌體的研究進(jìn)展與應(yīng)用[J]. 蔡劉體,汪漢成,袁賽飛,劉艷霞,石俊雄. 生物技術(shù)通訊. 2012(06)
[4]全國(guó)醫(yī)院感染監(jiān)控網(wǎng)醫(yī)院感染病原菌分布及變化趨勢(shì)[J]. 文細(xì)毛,任南,吳安華,徐秀華. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2011(02)
[5]噬菌體治療研究進(jìn)展[J]. 王盛,童貽剛. 微生物學(xué)通報(bào). 2009(07)
[6]3種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌5年的分離率及耐藥趨勢(shì)回顧[J]. 許宏濤,宣天芝,陶鳳榮,張秀珍. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2004(03)
[7]多藥耐藥銅綠假單胞菌院內(nèi)感染危險(xiǎn)因素及預(yù)后因素分析[J]. 曹彬,王輝,朱元玨,陳民鈞. 中華結(jié)核和呼吸雜志. 2004(01)
碩士論文
[1]屎腸球菌裂解性噬菌體Ec-ZZ2全基因序列的初步分析[D]. 鄭輝.吉林大學(xué) 2017
[2]鮑曼不動(dòng)桿菌裂解性噬菌體LZ35的分離鑒定和全基因組序列分析[D]. 郭鐘賀.吉林大學(xué) 2017
[3]銅綠假單胞菌PA2800在耐藥性和致病性中的作用研究[D]. 魏金花.西北大學(xué) 2010
本文編號(hào)：2977975
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