目的探討人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSC）對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（AECⅡ）凋亡的影響,及MEK/ERK信號通路在其中的作用。方法采用LPS與A549細(xì)胞共培養(yǎng)建立AECⅡ凋亡模型;將凋亡模型按隨機(jī)數(shù)字表法分成6組,分別與MSC條件培養(yǎng)基（MSC-CM）、MEK/ERK通路抑制劑（PD98059）及PBS體外共培養(yǎng),分別為A549+LPS+MSC、A549+LPS+PBS、A549+LPS+PD98059,陰性對照組為A549+PBS、A549+MSC、A549+PD98059,48 h后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測A549細(xì)胞凋亡情況;對MEK/ERK通路及凋亡相關(guān)信號（BAX/BCL-2、FAS、caspase 3及caspase 8）進(jìn)行qPCR檢測,對A549+LPS+MSC、A549+LPS+PBS、A549+PBS、A549+MSC四組組進(jìn)行Western blot檢測。結(jié)果建立A549+LPS凋亡模型。A549+LPS+MSC、A549+LPS+PD98059組與A549+LPS+PBS比較,凋亡率顯著下降。A549+LPS+MSC及A549+LPS+PD98... 

【文章來源】：中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2020年06期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Western blot檢測MEK/ERK通路及凋亡相關(guān)信號表達(dá)

MEK/ERK是Ras絲裂原信號轉(zhuǎn)導(dǎo)下游的核心元件，在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮著重要作用，當(dāng)細(xì)胞外刺激物（如LPS、細(xì)胞因子）與相應(yīng)受體結(jié)合后，SOS與受體或受體底物上的酪氨酸（Tyr）磷酸化位點(diǎn)結(jié)合，在Ras附近形成高濃度的SOS，其促使GTP取代Ras上的GDP而活化Ras，使MEK催化區(qū)中Thr和Ser磷酸化激活MEK，發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞凋亡的作用[16-17]。根據(jù)之前本課題組研究發(fā)現(xiàn)的膿毒癥所致ARDS中AECⅡ凋亡的機(jī)制與MEK/ERK磷酸化相關(guān)[8]，結(jié)合此次體外研究結(jié)果，即在LPS誘導(dǎo)A549凋亡模型中，p-MEK/p-ERK蛋白表達(dá)增高，本研究認(rèn)為可能是LPS激活Ras/MEK/ERK信號通路，促進(jìn)MEK和ERK磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞色素C的大量釋放，形成凋亡體后激活caspase 3，爆發(fā)級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致AECⅡ凋亡[18-19]。MSC通過旁分泌各種生長因子，彌補(bǔ)損傷情況下生物多樣性重要成分，發(fā)揮調(diào)節(jié)如NF-κB、PI3K/AKT等重要信號通路的活性，從而改善凋亡的作用[9,20]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過MSC-CM及PD98059與LPS誘導(dǎo)A549共培養(yǎng)，A549凋亡情況均改善，同時(shí)MSC與PD98059一致，其Bax/Bcl-2、Fas及MEK、MRK在基因水平與對照組存在明顯差異。且經(jīng)MSC及PD98059干預(yù)后，Bax/bal-2的比例及caspase 3也較對照組明顯下調(diào)。結(jié)合MSC干預(yù)組的BAX和FAS在蛋白水平的表達(dá)上顯著低于對照組，且p-MEK和pERK的蛋白表達(dá)同樣弱于對照組，充分說明MSC極有可能是通過抑制MEK/ERK信號通路的磷酸化，從而抑制AECⅡ的凋亡，但其上游相關(guān)信號（Raf/Ras）如何調(diào)控MEK/ERK的活化尚需進(jìn)一步的驗(yàn)證。

Annexin-V-FITC/PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡結(jié)果，如圖1所示，因隨著LPS濃度繼續(xù)增大，A549細(xì)胞以壞死為主[15]，故采用LPS(20μg/mL）建立誘導(dǎo)A549凋亡模型。2.2 hUC-MSC和PD98059干預(yù)后對LPS誘導(dǎo)的A549凋亡影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2938002