目的:建立穩(wěn)定敲低肝細胞內(nèi)氧化應(yīng)激感受器Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein1, Keap1）的模型,探討穩(wěn)定下調(diào)Keap1的缺氧肝細胞對小鼠肝星狀細胞（HSCs）基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）活性及其調(diào)控分子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2（TIMP-2）、MMP-14、小窩蛋白-1（Cav-1）的影響。方法:根據(jù)本組建立的方法,構(gòu)建Keap1下調(diào)的穩(wěn)轉(zhuǎn)肝細胞株,缺氧條件下培養(yǎng)Keap1下調(diào)的肝細胞,通過蛋白質(zhì)印跡法和QPCR驗證肝細胞中Keap1mRNA是否下調(diào)以及其下游分子和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的表達水平。利用上述肝細胞培養(yǎng)上清液干預(yù)小鼠肝星狀細胞株（HSC-T6）,分別收集小鼠HSC-T6細胞培養(yǎng)上清液和細胞,通過蛋白質(zhì)印跡法檢測小鼠HSC-T6細胞的Keap1、抗氧化應(yīng)激分子核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、MMP-2等蛋白表達,明膠酶譜法檢測小鼠HSC-T6細胞培養(yǎng)液上清中MMP-2活性。結(jié)果:穩(wěn)定敲低肝細胞內(nèi)氧化應(yīng)激感受器Keap 1后,Nrf2表達增高,腫瘤壞死因-α（TNF-α）表達減少。與對照組相比,敲... 

【文章來源】：東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2019年06期

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Keap1穩(wěn)定下調(diào)的肝細胞圖

以Keap1shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)的AML12細胞培養(yǎng)上清液作為條件培養(yǎng)基培養(yǎng)HSC- T6,明膠酶譜法測定MMP- 2的活性,結(jié)果顯示Keap1shRNA組較其他組MMP- 2活性增強。見圖6。圖3 Keap1shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)的AML12細胞在常氧和缺氧24 h Keap1的Keep1 mRNAs的表達

圖2 Keap1shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)的AML12細胞在常氧以及缺氧的情況下Keap1及Nrf2蛋白的表達2.7 TNF- α抑制劑處理后的AML12細胞上清對HSC- T6細胞TNF- α表達的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Liver fibrosis and hepatic stellate cells: Etiology, pathological hallmarks and therapeutic targets[J]. Chong-Yang Zhang,Wei-Gang Yuan,Pei He,Jia-Hui Lei,Chun-Xu Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2016(48)



本文編號：2933083