第一部分大鼠-小鼠嵌合體異種肺器官的研究研究背景利用人多功能干細胞培育組織/器官是再生醫(yī)學的終極目標。但是體外器官發(fā)育十分復雜,通過干細胞體外分化而獲得完整的器官是非常困難的。目前已有實驗室通過異種囊胚互補技術(shù)在Pdx-/-胰腺缺陷的小鼠體內(nèi)生長出大鼠PSC來源的胰腺組織。研究目的通過囊胚互補技術(shù),將大鼠iPSCs注射到TTF-1-/-小鼠的囊胚中,在小鼠體內(nèi)獲得互補再生的大鼠iPSCs來源的肺器官,并檢測和分析大鼠iPSCs在嵌合小鼠肺組織中的嵌合情況,來證明種間肺器官再生的可行性,為最終實現(xiàn)在豬體內(nèi)培育出人源化的肺器官奠定良好的理論和實驗基礎(chǔ)。研究方法（1）取TTF-1+/-雌性小鼠和TTF-1+/-雄性小鼠交配后第19天的小鼠胎兒,通過H&E染色來觀察其肺發(fā)育的情況。（2）通過堿性磷酸酶（Alkalinephosphatase,AP）染色的方法,鑒定大鼠iPSCs的狀態(tài)。同時,用 anti-C-myc,anti-Oct4,anti-SSEA-1 和 anti-Nanog 四種抗體,來檢測大鼠iPSCs的潛能性。（3）通過顯微操作技術(shù),將大鼠iPSCs作為供體細胞注射到TT... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１：囊胚互補再生胰臟??近互生器繼道，Ｉｓｏｔａｎｉ在胸腺缺陷的小鼠??

小鼠和雄性廣＂小鼠交配獲得７ＴＦ－７基因敲除小鼠的囊胚，然后通過囊胚互??補技術(shù)將大鼠ｉＰＳＣｓ注射到７ＴＦ－７基因敲除小鼠的囊胚中，在嵌合體小鼠體內(nèi)??生長出大鼠ｉＰＳＣｓ來源的肺器官。操作路線圖如圖１－２所示。??７７Ｆ－：Ｚ基因靶向ｓｇＲＮＡ??Ｉ??精子?Ｃａｓ９ｍＲＮＡ?＋?ｓｇＲＮＡ混合物??＼?／ＶＡＡ＾＂ｒＴ??ｒｒ?大鼠丨?ＰＳＣｓ??卵母細胞?合子?７ＴＦ－１基因缺陷??大鼠－小鼠嵌合體????＼??少?囊胚??Ｘ??ＰＭＳＧ，?ｈＣＧ超數(shù)排卵??圖１－２：實驗技術(shù)路線圖??１．２．２．２培養(yǎng)基的配制??（１）小鼠胚胎培養(yǎng)基ＫＳＯＭａａ：?０．５５５０ｇ氯化鈉，０．０１８６ｇ氯化鉀，０．００４７６ｇ磷酸??１９??

（２）?Ｃ５７ＢＬ／６小鼠繁育：４－６周齡的Ｃ５７ＢＬ／６雌鼠和８周齡的Ｃ５７ＢＬ／６雄鼠均??購自南京醫(yī)科大學動物房。４－６周齡Ｃ５７ＢＬ／６小鼠將用于超數(shù)排卵獲得卵母細??胞，用于體外受精。??１．２．２．５?Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ?和?ｓｇＲＮＡ?的構(gòu)建??Ｃａｓ９ｍＲＮＡ?（貨號：Ａ２９３７８）從?ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ?公司購買，ｓｇＲＮＡ?按?ＧｅｎｅＡｒｔ？??ｇＲＮＡ精準合成試劑盒（貨號：Ａ２９３７７）說明書中的步驟合成。Ｃａｓ９ｍＲＮＡ和??ｓｇＲＮＡ均保存于－８０°Ｃ超低溫冰箱，受精卵胞質(zhì)注射前將Ｃａｓ９?ｍＲＮＡ和ｓｇＲＮＡ??用ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ水混合。??１．２．２．６小鼠胚胎的獲取和移植??（１）超數(shù)排卵獲取小鼠胚胎??挑選健康的４－６周齡未成年雌性Ｃ５７Ｂ１／６品系小鼠，于１６：００注射孕馬血清促??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Overexpressing dominant-negative FGFR2-IIIb impedes lung branching morphogenesis in pigs[J]. Qin Chen,Bin Fang,Ying Wang,Chu Li,Xiaoxue Li,Ronggen Wang,Qiang Xiong,Lining Zhang,Yong Jin,Manling Zhang,Xiaorui Liu,Lin Li,Lisha Mou,Rongfeng Li,Haiyuan Yang,Yifan Dai.  Journal of Genetics and Genomics. 2018(03)
[2]Trends of incidence rate and age at diagnosis for cervical cancer in China,from 2000 to 2014[J]. Xueting Li,Rongshou Zheng,Xuemei Li,Haibin Shan,Qi Wu,Yan Wang,Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2017(06)
[3]特發(fā)性肺纖維化藥物治療的研究進展[J]. 李雅群,朱慶均,容蓉.  中南藥學. 2017(05)
[4]我國肺移植的發(fā)展現(xiàn)狀:問題與反思[J]. 王興安,姜格寧.  浙江醫(yī)學. 2016(24)
[5]重視特發(fā)性肺纖維化的并發(fā)癥[J]. 孫輝,李建生,謝洋.  中國全科醫(yī)學. 2015(26)
[6]塵肺防制的研究進展與展望[J]. 陳衛(wèi)紅.  中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2006(09)



本文編號：2918703