目的測(cè)定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4種不同種屬來(lái)源細(xì)胞中的抗病毒活性。方法利用RT-PCR技術(shù)從人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞（CaCo2）中擴(kuò)增獲得人IFN-λ1 （HuIFN-λ1）基因,然后克隆至真核表達(dá)載體pCDNA3.1-Flag-HA中,通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性菌落篩選、質(zhì)粒提取及測(cè)序,獲得重組質(zhì)粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,48 h后通過(guò)Western blot檢測(cè)HuIFN-λ1瞬時(shí)表達(dá)情況,取轉(zhuǎn)染后上清分別作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四種不同種屬來(lái)源細(xì)胞進(jìn)行HuIFN-λ1抗病毒活性分析。結(jié)果從人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞中擴(kuò)增獲得HuIFN-λ1基因,大小為600 bp,并在293細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)HuIFN-λ1,表達(dá)產(chǎn)物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)HuIFN-λ1處理的上述細(xì)胞熒光率分別為73.69%、80.12%、71.73%、69.47%。結(jié)論重組表達(dá)的人IFN-λ1蛋白對(duì)4種不同種屬來(lái)源的細(xì)胞均存在一定的抗病毒活性,為研究人IFN-λ1在宿... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019年10期 第1166-1170頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

圖１ＨｕＩＦＮ－λ１基因的ＰＣＲ產(chǎn)物１％瓊脂糖凝膠電泳分析

顯示與ＧｅｎＢａｎｋ中登錄的ＨｕＩＦＮ－λ１基因參考序列（ＡＹ１８４３７２．１）完全一致。ＭＤＮＡ標(biāo)志物（ＤＬ２０００）１ＨｕＩＦＮ－λ１基因ＰＣＥ產(chǎn)物圖１ＨｕＩＦＮ－λ１基因的ＰＣＲ產(chǎn)物１％瓊脂糖凝膠電泳分析ＭＤＬ２０００ＤＮＡｍａｋｅｒ１ＨｕＩＦＮ－λ１Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕＩＦＮ－λ１ｇｅｎｅ２重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建與鑒定以測(cè)序正確的ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１質(zhì)粒為模板，用引物Ｂ重新擴(kuò)增ＨｕＩＦＮ－λ１基因（圖２），回收并通過(guò)無(wú)縫克隆方式連接到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｆｌａｇ－ＨＡ表達(dá)載體上，獲得重組質(zhì)粒ｐｃＤＮＡ３．１－ＨｕＩＦＮ－λ１，測(cè)序表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。ＭＤＮＡ標(biāo)志物（ＤＬ２０００）１ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ＰＣＲ產(chǎn)物圖２重組質(zhì)粒ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ＰＣＲ鑒定ＭＤＬ２０００ＤＮＡｍａｋｅｒ１ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｈｕｍａｎＩＦＮ－λ１（ＨｕＩＦＮ－λ１）Ｆｉｇ．２ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ｇｅｎｅ３ＨｕＩＦＮ－λ１在２９３細(xì)胞中的表達(dá)鑒定重組質(zhì)粒ｐｃＤＮＡ３．１－ＨｕＩＦＮ－λ１轉(zhuǎn)染２９３細(xì)胞４８ｈ，利用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測(cè)ＨｕＩＦＮ－λ１瞬時(shí)表達(dá)情況，結(jié)果見(jiàn)圖３，在（２２－２５）×１０３之間有單一反應(yīng)條帶，表達(dá)空白載體對(duì)照無(wú)此條帶，表明ＨｕＩＦＮ－λ１在２９３細(xì)胞中成功表達(dá)且具有反應(yīng)原性。Ｍ蛋白分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)１空載體對(duì)照２重組ＨｕＩＦＮ－λ１與Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ抗體反應(yīng)條帶圖３

圖３重組ＨｕＩＦＮ－λ１的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Ⅲ型干擾素——新型抗病毒細(xì)胞因子[J]. 楊祎,侯煒.  生命科學(xué). 2011(08)
[2]豬α干擾素在大腸桿菌中的表達(dá)及抗病毒活性檢測(cè)[J]. 崔保安,陳紅英,張素梅,劉占通,金喜新,宋凌云.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2008(04)

博士論文
[1]豬α干擾素、豬β干擾素與豬γ干擾素的抗病毒活性及其免疫佐劑的研究[D]. 姚清俠.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]豬Ⅲ型干擾素IFN-λ1的克隆、表達(dá)和抗病毒活性研究[D]. 趙付偉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]人IFN-λ1基因的克隆、表達(dá)及抗病毒活性的研究[D]. 王建紅.蘇州大學(xué) 2003



本文編號(hào)：2900068