本文關(guān)鍵詞：基于泛素-弓形蟲多價抗原的重組疫苗對小鼠的免疫保護性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲是一種重要的機會致病性原蟲,呈世界性廣泛分布,可感染所有溫血哺乳動物及鳥類。正常人感染弓形蟲通常表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染,但孕早期婦女在感染弓形蟲后,可能會導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)甚至死產(chǎn),幸存者也常遺留嚴重的新生兒神經(jīng)和視網(wǎng)膜病變。而當人類或其他宿主免疫力降低或缺乏時,弓形蟲即可在體內(nèi)大量繁殖并引起如弓形蟲腦病之類的嚴重的臨床癥狀甚至死亡。由于現(xiàn)階段并沒有有效的藥物來治療弓形蟲病,因此對于抗弓形蟲疫苗的研究是非常有前景的。目前,關(guān)于抗弓形蟲疫苗目前有大量的研究,包括滅活疫苗,減毒活疫苗以及基因工程疫苗。但是,減毒活疫苗可能發(fā)生毒力返強,存在再感染的可能。而基于不同弓形蟲抗原的基因工程疫苗因其抗弓形蟲感染的安全有效而得到人們越來越多的關(guān)注。然而,許多研究顯示基于不同弓形蟲抗原的DNA疫苗雖被證實可引起保護性的Thl型免疫反應(yīng)抵抗弓形蟲感染,但由于弓形蟲有三個感染時期：速殖子,緩殖子(存在于包囊)和子孢子(存在于卵囊),從而使基于弓形蟲單一感染階段的抗原的疫苗不能產(chǎn)生完整的抗弓形蟲的保護作用。因此,構(gòu)建含有弓形蟲多生活史時期抗原組成的多價疫苗是十分必要的。我們從弓形蟲速殖子,緩殖子以及子孢子時期的抗原中篩選出7個富含CD8+T細胞表位的抗原蛋白片段SAG3101-144,ROP18347-396,MIC6288-347,GRA7182-224,MAG158-125,BAG1156-211和SPA142-200,及1個CD4+T細胞表位,AS15,并將它們連接起來構(gòu)建了弓形蟲多階段抗原片段；并與泛素佐劑連接,構(gòu)建表達泛素-弓形蟲多階段抗原的重組DNA和腺病毒疫苗；我們將這兩種疫苗單獨和聯(lián)合免疫小鼠,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗及流式細胞術(shù)方法檢測小鼠免疫后所產(chǎn)生的體液和細胞免疫水平,并評估疫苗抗Ⅰ型和Ⅱ弓形蟲攻擊的保護性。結(jié)果顯示,重組DNA疫苗在誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫方面具有優(yōu)勢,相比于重組腺病毒疫苗來說可以誘導(dǎo)產(chǎn)生更高水平的抗體IgG及IgG2a;而重組腺病毒疫苗則能更有效的提高細胞免疫反應(yīng)水平,誘導(dǎo)產(chǎn)生Th1型細胞因子IL-2,IFN-γ,而且脾細胞增殖增殖水平有明顯提高,流式細胞術(shù)檢測脾淋巴細胞分型的實驗結(jié)果可以看出T淋巴細胞增多,且以CD8+T細胞亞群為主。在對小鼠使用不同免疫策略進行預(yù)防接種的實驗中,結(jié)果顯示先DNA疫苗后腺病毒疫苗免疫策略則能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生最強的體液免疫和細胞免疫水平。而且這種免疫策略可使小鼠在Ⅰ型RH株弓形蟲速殖子感染時獲得最高的生存率(67%),并在Ⅱ型PRU株弓形蟲包囊感染時腦內(nèi)包囊形成數(shù)目最低(296±92)。綜上所述,本研究證實表達泛素-弓形蟲多階段抗原的重組DNA和腺病毒疫苗通過異源性的免疫策略(先DNA疫苗后腺病毒疫苗)可保護小鼠抵抗弓形蟲的急性和慢性感染,是一種有潛力的候選疫苗,為未來研制有效的弓形蟲疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 DNA疫苗 腺病毒疫苗 泛素
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392-33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 前言11-16
• 第一章：表達泛素-弓形蟲多階段抗原DNA疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫16-31
• 材料16-17
• 方法17-23
• 結(jié)果23-28
• 討論28-30
• 本章小結(jié)30-31
• 第二章：重組腺病毒疫苗的構(gòu)建及小鼠免疫的實驗研究31-43
• 材料31
• 方法31-34
• 結(jié)果34-40
• 討論40-42
• 本章小結(jié)42-43
• 第三章：重組DNA疫苗和腺病毒疫苗聯(lián)合免疫的實驗研究43-52
• 材料43
• 方法43-44
• 結(jié)果44-49
• 討論49-51
• 本章小結(jié)51-52
• 結(jié)論與展望52-54
• 參考文獻54-60
• 附錄60-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文、參與課題及獲得獎勵66-67
• 附件67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王芹;李進;王穎嬡;宋力;岳井銀;穆傳杰;樊飛躍;;人IL-21cDNA的克隆及重組腺病毒表達載體的構(gòu)建[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年04期

2 邢宇玲;辛?xí)悦?金英玉;;血小板在機體清除腺病毒中的作用[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2012年22期

3 王江璐;計紅;張偉宏;赫榮賀;郭景茹;郭麗;楊煥民;;ENO1過表達對籽鵝卵泡顆粒細胞凋亡基因Bcl-2表達的影響[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年07期

4 龐小娟;李曉軍;秦浚川;;腺病毒載體純化及在腫瘤基因治療中的應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2009年12期

5 楊淑娟;樊紅艷;張萍;朱曉紅;薛榮利;哈小琴;;腺病毒感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及其對細胞增殖的影響[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2015年10期

6 肖維;彭健;張陽德;;mPEG-CS納米粒介導(dǎo)livinshRNA基因納米復(fù)合物的制備及轉(zhuǎn)染效率[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年16期

7 蘭芬;杜之渝;黃正;吳寧玲;;腺病毒與慢病毒載體轉(zhuǎn)染離體兔角膜基質(zhì)細胞的有效性對比研究[J];眼科新進展;2012年02期

8 樸春姬;田梅;楊巍;李修義;;攜帶人可溶性TRAIL基因的重組腺病毒在肺癌細胞中的轉(zhuǎn)染效率及表達特性研究[J];中國實驗診斷學(xué);2010年10期

9 蔣開玲;鐘梁;陽小群;王慧;馬鵬鵬;朱新瑜;劉北忠;;人RARα基因重組腺病毒表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其對人白血病NB4細胞的影響研究[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2014年09期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王宏芳;CRAd.pEgr1-Smac聯(lián)合照射對MDA-MB-231腫瘤細胞的抑制效應(yīng)[D];吉林大學(xué);2011年

2 王鵬;表達His-tag-ICP47融合基因腺病毒載體的構(gòu)建及其免疫活性的研究[D];鄭州大學(xué);2011年

3 段春光;雙基因修飾促進組織工程化人工骨血管化的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 謝軍平;人livinα基因重組腺病毒感染樹突狀細胞抗Lewis肺癌的免疫學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 郭景茹;腺病毒介導(dǎo)的HSP70對冷應(yīng)激大鼠CKs、應(yīng)激激素及相應(yīng)受體的影響[D];吉林大學(xué);2012年

6 劉揚;CRAd.pEgrl-Trail聯(lián)合放療對人乳腺癌細胞殺傷效應(yīng)的實驗研究[D];吉林大學(xué);2012年

7 邱立;兔病毒性出血癥病毒遺傳變異及口服疫苗的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

8 吳嘉慧;CRAd.pEgrl-TRAIL-Smac聯(lián)合放射對MDA-MB-231細胞殺傷效應(yīng)的研究[D];吉林大學(xué);2013年

9 陳浩;Livin α基因修飾樹突狀細胞體外激活細胞免疫的抗肺癌細胞系效應(yīng)[D];華中科技大學(xué);2013年

10 劉威武;三重靶向CRAd.pE-Smac聯(lián)合X射線照射對MDA-MB-231細胞的體外殺傷作用[D];吉林大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：基于泛素-弓形蟲多價抗原的重組疫苗對小鼠的免疫保護性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：288288