大容量全合成噬菌體展示抗體庫(kù)可用于針對(duì)特異靶點(diǎn)生產(chǎn)高親和力抗體,是重要的單克隆抗體來(lái)源,其中親和淘篩策略是影響抗體篩選效果的關(guān)鍵。親和淘篩中的多樣性損失會(huì)降低高親和力抗體獲得概率,為探究親和淘篩多樣性損失最小的篩選策略,分別以PCSK9,CD20為靶點(diǎn),用全合成噬菌體展示抗體庫(kù)淘篩,通過(guò)滴度測(cè)定與測(cè)序分析比較首輪淘篩中酸洗脫與宿主菌直接感染所得洗脫物的框架與多樣性差異。同時(shí)采取直接液體擴(kuò)增、刮板后液體擴(kuò)增,以及30、37℃兩種擴(kuò)增溫度探究不同擴(kuò)增條件對(duì)次級(jí)庫(kù)框架分布的影響。最佳淘篩方法效果通過(guò)PCSK9,CD20多輪淘篩后的單克隆phage-Elisa結(jié)果驗(yàn)證。研究結(jié)果表明合并酸洗脫與宿主菌洗脫噬菌體,30℃直接液體擴(kuò)增可以使合成庫(kù)首輪淘篩多樣性損失最低,采用此法獲得了靶向PCSK9與CD20的陽(yáng)性序列。最終開(kāi)發(fā)了一種保留全合成噬菌體抗體庫(kù)多樣性效果好、實(shí)驗(yàn)周期短的淘篩方法�？晒┤铣墒删w抗體庫(kù)進(jìn)行高效的抗體篩選,有效推進(jìn)了抗體藥物早期發(fā)現(xiàn)進(jìn)程。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要試劑與儀器
        1.1.2 菌株與抗體庫(kù)
    1.2 方法
        1.2.1 輔助噬菌體儲(chǔ)液與噬菌體抗體庫(kù)制備
        1.2.2 親和淘篩
        1.2.3滴度測(cè)定與測(cè)序分析
        1.2.4 制備PCSK9次級(jí)庫(kù)
        1.2.5 anti-PCSK9 sc Fv與anti-CD20 sc Fv的親和淘篩與初步鑒定
        1.2.6 單克隆phage-Elisa
2 結(jié)果
    2.1 噬菌體文庫(kù)的制備與鑒定
    2.2 洗脫方式對(duì)淘篩效果的影響
    2.3 制備方式對(duì)次級(jí)庫(kù)質(zhì)量的影響
    2.4 合成抗體庫(kù)最佳淘篩方法驗(yàn)證
3 討論

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