發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 13:56

　　 布魯氏菌(Brucella)是一種革蘭陰性胞內(nèi)寄生菌,能感染人和動物引起人畜共患傳染病-布魯氏菌病(簡稱布病)。其感染途徑多樣:呼吸道、消化道和皮膚接觸,其中以氣溶膠形式經(jīng)呼吸道感染是常見的感染途徑之一,免疫預(yù)防是防控布病最有效的方法。目前,對布魯氏菌液體氣溶膠免疫和感染毒理尚不清楚,本研究以BALB/c小鼠為研究對象,初步探究布魯氏菌液體氣溶膠對小鼠免疫和毒理作用。第一部分布魯氏菌液氣溶膠肺部感染途徑小鼠模型建立及毒理評價(jià)目的:建立布魯氏菌液體氣溶膠肺部感染途徑小鼠模型并進(jìn)行毒理評價(jià)。方法:選取6~8周齡BALB/c雌鼠,經(jīng)肺遞送和滴鼻兩種途徑感染布魯氏菌S19-CN,分別于第0、2、4、6、8周觀察并記錄臨床體征并采集樣本,進(jìn)行脾臟和肺臟載菌量計(jì)數(shù)及血清抗體和細(xì)胞因子(血清和肺勻漿)檢測。結(jié)果:與空白對照組比較,S19-CN肺遞送組、S19-CN滴鼻組感染后小鼠均未見臨床病癥;體重?zé)o顯著下降;脾臟質(zhì)量分別在感染后第2周、第4周達(dá)到峰值;肺載菌量均在第2周達(dá)到峰值,約10~7CFU/g;血清抗體均在感染后8周內(nèi)維持較高水平,細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α在血清中和肺勻漿中的濃度分別在第2周和第4周達(dá)到高峰,肺遞送組峰值高于滴鼻組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:本研究通過布魯氏菌S19-CN液體氣溶膠肺遞送感染BALB/c小鼠,成功建立布魯氏菌液體氣溶膠感染小鼠模型。S19-CN引起B(yǎng)ALB/c小鼠慢性感染,脾腫大明顯,毒理作用顯著;同時(shí)激發(fā)了較強(qiáng)的細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)。第二部分布魯氏菌液體氣溶膠免疫BALB/c小鼠的有效性評價(jià)和安全性研究目的:布魯氏菌104M液體氣溶膠肺遞送途徑免疫BALB/c小鼠,評估布魯氏菌104M液體氣溶膠對小鼠免疫有效性和安全性。方法:選取6~8周齡BALB/c雌鼠,經(jīng)肺遞送、滴鼻和皮下注射三種途徑分別免疫接種布魯氏菌104M,分別于免疫后第4、8、16、24周觀察并記錄臨床體征,采集樣本,用于體重、脾重、脾臟載菌量計(jì)數(shù)及抗體(血清)和細(xì)胞因子(血清和肺勻漿)檢測。免疫后22周,用布魯氏菌S19-CN液體氣溶膠肺遞送攻毒。結(jié)果:各組實(shí)驗(yàn)小鼠均未見臨床病癥;體重?zé)o顯著變化;脾臟無腫大。在攻毒前的時(shí)間點(diǎn),各免疫組脾臟載菌(CFU/g)均顯著高于空白對照組(P0.05),隨著時(shí)間的增長,脾臟載菌量呈下降趨勢,在免疫后第20周完全清除。S19-CN攻毒后2周(即104M免疫24周后),各免疫組的脾臟載菌量均顯著低于空白對照組(P0.05)。在免疫后4周檢測到高滴度布魯氏菌104M特異性抗體,第8周達(dá)到高峰。在每一個(gè)檢測時(shí)間點(diǎn),血清抗體滴度IgG2a高于IgG1,說明布魯氏菌104M激發(fā)BALB/c小鼠Th1為主的免疫反應(yīng)。攻毒前,各免疫組血清和肺勻漿中IFN-γ和IL-18濃度均顯著高于空白對照組(P0.05),攻毒后,各免疫組血清IFN-γ和IL-18濃度均低于空白對照組(P0.05),而肺勻漿細(xì)胞因子濃度依然高于空白對照組(P0.05)。以上所有檢測指標(biāo),三種免疫途徑之間均無顯著差異(P0.05)。結(jié)論:液體氣溶膠肺遞送途徑是一種有效的免疫途徑。布魯氏菌104M激發(fā)了BALB/c小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng),攻毒實(shí)驗(yàn)顯示顯著有效的保護(hù)作用,104M在小鼠體內(nèi)存活時(shí)間較長,有一定的殘余毒力。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

圖 1 小鼠體重和脾重變化Fig 1 Dynamic changes of the body weight and spleen weight注：圖A：在感染0、2、4、6、8周Z1、Z2、Z3、Z4小鼠體重變化比較；圖B：在感染0、2、4、6、8周Z1、Z2、Z3、Z4小鼠脾重變化比較。

圖 2 小鼠脾肺載菌量變化Fig 2 Dynamic changes of the bacteria burden in spleens (A) and lungs (B)圖A：在感染0、2、4、6、8周Z1、Z2、Z3、Z4小鼠脾臟載菌量變化；圖B：在感染0、2、4、6、8周Z1、Z2、Z3、Z4小鼠肺臟載菌量變化。

圖 3 小鼠血清抗體水平變化Fig 3 Dynamic changes of the serum antibodies level：圖A：在感染0、2、4、6、8周Z1、Z3小鼠血清抗體IgG滴度變化；
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2868664