革蘭氏陽性菌脂磷壁酸在細(xì)胞的黏附、定植及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。目前,丁酸梭菌脂磷壁酸(Clostidium butyricum lipoteichoic acid,bLTA)對宿主細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確,本文通過研究致病菌金黃色葡萄球菌的脂磷壁酸(Staphylococcus aureus lipoteichoic acid,aLTA)及 bLTA 對 NR8383 細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響,為揭示bLTA對NR8383細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供進(jìn)一步理論依據(jù)。本研究利用FTIR和NMR對aLTA及bLTA進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,發(fā)現(xiàn)二者主鏈上均含甘油單體,側(cè)鏈上的羥基均由N-乙酰葡萄糖胺及丙氨酸修飾,其中aLTA含有更多甘油單體,N-乙酰葡萄糖胺及丙氨酸修飾。CCK-8及CellTiter-Lumi等實(shí)驗(yàn)表明,aLTA及bLTA均能抑制NR8383細(xì)胞增殖,但bLTA對生長增殖的影響較小。細(xì)胞凋亡分析表明,與aLTA處理組相比,20、40、60、80μg/mL的bLTA處理組,細(xì)胞凋亡率分別下降19.07%、15.13%、11.57%和14.46%。轉(zhuǎn)錄組測序及RNA干擾研究發(fā)現(xiàn),TLR2是aLTA、bLTA識別結(jié)合的細(xì)胞膜受體。Q-PCR分析結(jié)果表明,bLTA處理組的IL-1β和TNF-α轉(zhuǎn)錄水平遠(yuǎn)小于aLTA處理組。Western Blotting研究也表明,bLTA刺激細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥效應(yīng)弱于aLTA處理組,這提示bLTA對NR8383細(xì)胞的炎癥刺激作用明顯較弱。敲減TLR2后,aLTA及bLTA刺激細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的能力均得到下調(diào)。這表明,LTA對NR8383的炎癥刺激作用可能與其結(jié)構(gòu)有關(guān);bLTA的刺激作用明顯弱于aLTA;TLR2是bLTA識別與結(jié)合NR8383細(xì)胞的膜受體蛋白,該受體受到bLTA刺激后,細(xì)胞NF-κB信號通路被激活,p65蛋白被磷酸化并入核,啟動IL-1β、TNF-α等的轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生并分泌低水平的炎癥因子,刺激NR8383細(xì)胞的免疫活性。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

圖２．１?ａＬＴＡ、ｂＬＴＡ紅外譜圖??Ｆｉｇ．２．１?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ?ｉｎｆｒａｒｅｄ?ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｍ??表２．３?ａＬＴＡ、ｂＬＴＡ結(jié)構(gòu)上的基團(tuán)??Ｔａｂｌｅ?２．３?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ?ｓｔｒｕｃｕｒａｌ?ｇｒｏｕｐ??ａＬＴＡ?ｂＬＴＡ??３４２７．００?３４１６．４１?＾ＮＨ??２９３５．８７?２９２３．１７?－ＣＨ２．?－ＣＨ３??１６４５．３０?１６３８．１０?＿Ｃ＝〇??１５４１．２０?１５４１．５９?－Ｃ＝Ｈ??１３９６．８３?１３７７．７８?－Ｐ＝〇??１０７１．７５?１０４１．２７?－￡－〇???ｌｌ??

Ｆｉｇ．２．２?Ｈ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｍａｇｎｅｔｉｃ?ｒｅｓｏｎａｎｃｅ?ｏｆ?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ??２．５本章小結(jié)??紅外圖譜表明ａＬＴＡ和ｂＬＴＡ所含的基團(tuán)一致，提示提純的產(chǎn)物為丁酸梭菌??脂磷壁酸。核磁氫譜進(jìn)一步分析表明ａＬＴＡ含更多的甘油單體、Ｎ－乙酰葡萄糖胺??及丙氨酸修飾，結(jié)構(gòu)上的不同可能是二者功能不同的原因之一。??

?２４?ｈ??圖３．２?ＬＰＳ對細(xì)胞遷移能力的影響??Ｆｉｇ．３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＬＰＳ?ｏｎ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｉｅ
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜蘭蘭;王洋;劉蕾;李平蘭;;類植物乳桿菌L-ZS9黏附特性研究及胃腸道環(huán)境對其黏附力的影響[J];食品科技;2015年12期

2 龔虹;黃少磊;劉斌;馮謙;李云旭;李曉軍;馬躍英;付艷茹;劉彥民;;長雙歧桿菌NQ-1501脂磷壁酸提取及免疫功能的研究[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2015年09期

3 李迎雪;陳丹丹;張茹;姚君;宋洋;;雙歧桿菌脂磷壁酸通過激活小鼠腹腔巨噬細(xì)胞MEK/ERK通路促進(jìn)TNF-α的表達(dá)[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2015年04期

4 孫利紅;黃象安;崔寧;趙紅杰;;楓蓼腸胃康顆粒聯(lián)合雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療急性感染性腹瀉66例的臨床觀察[J];北京醫(yī)學(xué);2014年09期

5 龐瑞鵬;;乳酸桿菌黏附人腸道上皮功能的研究進(jìn)展[J];中國奶牛;2014年15期

6 張麗;趙莉;;酪酸梭菌、嬰兒型雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑治療兒科最常見3種不同類型腹瀉的療效觀察[J];中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志;2014年02期

7 張善亭;史燕;張淑麗;王海寬;;丁酸梭菌的研究應(yīng)用進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報;2013年09期

8 黃國珍;陳偉布;李麗梅;黃新民;;雙歧桿菌的脂磷壁酸激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的信號通路[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2013年21期

9 易中華;;飼用微生態(tài)制劑丁酸梭菌的研究與應(yīng)用進(jìn)展[J];飼料研究;2012年02期

10 李開艷;熊盛道;熊維寧;曹勇;朱晶;;Toll樣受體2信號對小鼠淋巴瘤EL4細(xì)胞系表達(dá)IL-17的影響[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 高權(quán)新;丁酸梭菌與腸道上皮細(xì)胞互作的分子機(jī)制的研究[D];浙江大學(xué);2012年

本文編號：2863023