目的:高脂飲食喂養(yǎng)的ICR孕鼠,胎盤存在炎癥。檢測胎盤組織NLRP3炎性小體的活性變化。進一步建立體外人絨癌細胞JEG3炎癥模型,用DHA給予干預,測試細胞相關分子水平和炎癥指標的變化,旨在探討DHA對NLRP3炎性小體和NF-κB的信號通路調控,驗證DHA通過抑制NLRP3炎性小體和NF-κB信號通路調控胎盤炎癥的假設,為進一步在肥胖孕婦中開展臨床DHA補充提供實驗證據(jù)。方法:ICR小鼠8周齡開始適應性飼喂,一周后進行合籠。受孕成功的孕鼠被隨機分成兩組:普通飲食對照組(C)和高脂飲食組(H),于孕18天,水合氯醛麻醉孕鼠并取其胎盤,用逆轉錄PCR(qRT-PCR)和Western Blotting(WB)檢測胎盤中NLRP3炎癥小體Caspase-1,IL-1β和NF-κB的基因和蛋白表達水平;選擇人絨癌細胞JEG3,用細菌脂多糖(LPS)刺激構建細胞炎癥模型,分為6組:對照組()、LPS組、LPS+DHA低濃度組、LPS+DHA中濃度組、LPS+DHA高濃度組、DHA組;CCK-8法觀察不同濃度DHA對JEG3細胞活力的影響;用LPS和三磷酸腺苷(ATP)刺激JEG3細胞,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測細胞上清液中炎性細胞因子IL-1β的分泌情況;WB法檢測NLRP3炎癥小體各組分(NLRP3和caspase-1)和NF-κB信號通路的表達變化和IL-1β的蛋白表達情況;qRT-PCR檢測相關基因mRNA水平;應用活性氧ROS探針進行熒光定量實驗,觀察DHA對LPS+ATP誘導JEG3細胞中ROS活性氧生成的影響。結果:高脂飲食孕鼠胎盤NLRP3、Casepase-1和IL-1βmRNA表達水平與對照組相比有升高趨勢,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),ASC和Pro-caspase-1的基因表達水平差異沒有統(tǒng)計學意義。高脂組胎盤炎癥小體組分中NLRP3、Caspase-1蛋白表達水平較對照組有上調趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),ASC和Pro-caspase-1蛋白表達無明顯差異;IL-1β蛋白表達水平相對于對照組有上升趨勢(P0.01),但Pro-IL-1β在高脂組和對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義。細胞培養(yǎng)實驗,不同濃度的DHA干預結果顯示:細胞增殖/毒性測試,在不同濃度DHA的干預下,對JEG3細胞活力幾乎無影響;ELISA檢測細胞上清液結果顯示DHA可抑制LPS+ATP誘導的IL-1β的分泌,且存在一定的劑量依存關系;在基因水平上,相對于對照組,LPS處理組導致細胞炎癥的產生,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達有升高的趨勢,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);與LPS誘導組相比,DHA+LPS+ATP處理組對NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達水平有一定的下調作用,且隨著DHA濃度的升高,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達水平均有降低的趨勢(P0.05);在蛋白水平上,DHA可以抑制LPS+ATP誘導的炎癥信號NF-κB(P65)和炎性小體的激活,抑制NLRP3炎性小體活化、Caspase-1剪切和IL-1β的分泌(P0.05);根據(jù)熒光法檢測細胞內活性氧ROS的水平,DHA可通過減少ROS的產生來減緩JEG3細胞炎癥的發(fā)生。結論:DHA可能通過抑制炎性小體NLRP3的活化和NF-κB信號通路來調控胎盤炎癥,改善胎兒出生結局,結果為進一步在肥胖孕婦中開展臨床DHA補充提供了部分實驗證據(jù)。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R392
【文章目錄】：
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Abstract
前言
材料與方法
結果
討論
結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻

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本文編號：2846415