目的:高脂飲食喂養(yǎng)的ICR孕鼠,胎盤(pán)存在炎癥。檢測(cè)胎盤(pán)組織NLRP3炎性小體的活性變化。進(jìn)一步建立體外人絨癌細(xì)胞JEG3炎癥模型,用DHA給予干預(yù),測(cè)試細(xì)胞相關(guān)分子水平和炎癥指標(biāo)的變化,旨在探討DHA對(duì)NLRP3炎性小體和NF-κB的信號(hào)通路調(diào)控,驗(yàn)證DHA通過(guò)抑制NLRP3炎性小體和NF-κB信號(hào)通路調(diào)控胎盤(pán)炎癥的假設(shè),為進(jìn)一步在肥胖孕婦中開(kāi)展臨床DHA補(bǔ)充提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。方法:ICR小鼠8周齡開(kāi)始適應(yīng)性飼喂,一周后進(jìn)行合籠。受孕成功的孕鼠被隨機(jī)分成兩組:普通飲食對(duì)照組(C)和高脂飲食組(H),于孕18天,水合氯醛麻醉孕鼠并取其胎盤(pán),用逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)和Western Blotting(WB)檢測(cè)胎盤(pán)中NLRP3炎癥小體Caspase-1,IL-1β和NF-κB的基因和蛋白表達(dá)水平;選擇人絨癌細(xì)胞JEG3,用細(xì)菌脂多糖(LPS)刺激構(gòu)建細(xì)胞炎癥模型,分為6組:對(duì)照組()、LPS組、LPS+DHA低濃度組、LPS+DHA中濃度組、LPS+DHA高濃度組、DHA組;CCK-8法觀察不同濃度DHA對(duì)JEG3細(xì)胞活力的影響;用LPS和三磷酸腺苷(ATP)刺激JEG3細(xì)胞,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)細(xì)胞上清液中炎性細(xì)胞因子IL-1β的分泌情況;WB法檢測(cè)NLRP3炎癥小體各組分(NLRP3和caspase-1)和NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)變化和IL-1β的蛋白表達(dá)情況;qRT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因mRNA水平;應(yīng)用活性氧ROS探針進(jìn)行熒光定量實(shí)驗(yàn),觀察DHA對(duì)LPS+ATP誘導(dǎo)JEG3細(xì)胞中ROS活性氧生成的影響。結(jié)果:高脂飲食孕鼠胎盤(pán)NLRP3、Casepase-1和IL-1βmRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比有升高趨勢(shì),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),ASC和Pro-caspase-1的基因表達(dá)水平差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高脂組胎盤(pán)炎癥小體組分中NLRP3、Caspase-1蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組有上調(diào)趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),ASC和Pro-caspase-1蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異;IL-1β蛋白表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組有上升趨勢(shì)(P0.01),但Pro-IL-1β在高脂組和對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),不同濃度的DHA干預(yù)結(jié)果顯示:細(xì)胞增殖/毒性測(cè)試,在不同濃度DHA的干預(yù)下,對(duì)JEG3細(xì)胞活力幾乎無(wú)影響;ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液結(jié)果顯示DHA可抑制LPS+ATP誘導(dǎo)的IL-1β的分泌,且存在一定的劑量依存關(guān)系;在基因水平上,相對(duì)于對(duì)照組,LPS處理組導(dǎo)致細(xì)胞炎癥的產(chǎn)生,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達(dá)有升高的趨勢(shì),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與LPS誘導(dǎo)組相比,DHA+LPS+ATP處理組對(duì)NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達(dá)水平有一定的下調(diào)作用,且隨著DHA濃度的升高,NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因表達(dá)水平均有降低的趨勢(shì)(P0.05);在蛋白水平上,DHA可以抑制LPS+ATP誘導(dǎo)的炎癥信號(hào)NF-κB(P65)和炎性小體的激活,抑制NLRP3炎性小體活化、Caspase-1剪切和IL-1β的分泌(P0.05);根據(jù)熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧ROS的水平,DHA可通過(guò)減少ROS的產(chǎn)生來(lái)減緩JEG3細(xì)胞炎癥的發(fā)生。結(jié)論:DHA可能通過(guò)抑制炎性小體NLRP3的活化和NF-κB信號(hào)通路來(lái)調(diào)控胎盤(pán)炎癥,改善胎兒出生結(jié)局,結(jié)果為進(jìn)一步在肥胖孕婦中開(kāi)展臨床DHA補(bǔ)充提供了部分實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R392
【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)

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本文編號(hào)：2846415