NF-κB信號通路是TNF激活的主要信號通路,總的來說,當(dāng)TNF作用于細(xì)胞時,會引起細(xì)胞內(nèi)三條信號通路。其中,NF-κB信號通路是體內(nèi)主要的信號通路。三十年轉(zhuǎn)瞬即逝,在全球眾多實(shí)驗(yàn)室的不懈努力下,NF-κB的研究取得了令人欣喜的進(jìn)展,它在免疫應(yīng)答中所起的作用是有目共睹的。在體內(nèi),NF-κB積極參與免疫系統(tǒng)眾多環(huán)節(jié)的調(diào)控,它在進(jìn)化上的保守性說明了 NF-κB不可替代的地位。然迄今為止,關(guān)于NF-κB信號通路調(diào)節(jié)方面,仍存在很多尚未解決的問題。眾所周知,泛素化是生物體內(nèi)為了維持正常的秩序而誕生的蛋白質(zhì)修飾。許多研究表明,泛素化是調(diào)控免疫反應(yīng)的一種重要機(jī)制,它在NF-κB信號傳導(dǎo)過程中至關(guān)重要。[1]試想一下,假如沒有泛素化的存在,生命會變得多么糟糕。眾人皆知,TAK1在促存活與促死亡方面起著不可動搖的作用。通過對TAK1這個蛋白的研究,我們的目光注意到了 TAK1連接蛋白——TAB2。據(jù)我們觀察,當(dāng)TAB2與TAK1二者相互連接的時候,TAB2的蛋白會表達(dá)呈顯著降低。事先已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)TAB2-TAK1能夠相結(jié)合,但關(guān)于TAK1-TAB1/2/3復(fù)合物功能的調(diào)控機(jī)制還有待研究。在本實(shí)驗(yàn)室的其它課題中,我們發(fā)現(xiàn)TAB2蛋白與TAK1及其片段共表達(dá)時,TAB2蛋白表達(dá)水平下降。于是,我們猜想TAB2蛋白水平的下降是否是由于發(fā)生泛素化所導(dǎo)致的。在證實(shí)TAB2蛋白水平的下降與蛋白酶體有關(guān)后,我們繼續(xù)尋找與TAB2的E3連接酶。通過實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)TAB2蛋白能夠被E3連接酶ITCH泛素化調(diào)控。此結(jié)果負(fù)調(diào)控NF-κB信號通路,敦促細(xì)胞走向死亡深淵。由于TNF能會導(dǎo)致炎癥,而炎癥反應(yīng)又許多自身免疫性疾病有著十分緊密的聯(lián)系。例如,癌癥,心臟病和關(guān)節(jié)炎等長期困擾人類的疾病,都與炎癥的發(fā)生息息相關(guān)。本論文發(fā)現(xiàn)了在TNF刺激的NF-κB信號通路中調(diào)控TAK1-TAB1/2/3復(fù)合體功能的一種重要機(jī)制。我們推測,E3連接酶ITCH能夠通過泛素化降解TAB2蛋白,從而負(fù)調(diào)控于TNF刺激的NF-κB信號通路。倘若,E3泛素連接酶ITCH調(diào)控的TAB2蛋白泛素化降解這一步驟受到阻礙。那么,可能會導(dǎo)致TNF過度激活NF-κB,從而使得細(xì)胞的生長失去控制,這對生物體的發(fā)展有著難以估量的影響。因此,這個新機(jī)制的發(fā)現(xiàn),或能助力于臨床醫(yī)療上找尋新的藥物靶點(diǎn),并且為某些與炎癥反應(yīng)相關(guān)疾病開辟新的道路與方向。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R346
【部分圖文】：

Ｎｕｃｌｅｕｓ??圖１．１?ＴＮＦａ誘導(dǎo)的細(xì)胞存活，凋亡和壞死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：該圖引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信號通路??

?－??Ｎｕｃｌｅｕｓ??圖１．１?ＴＮＦａ誘導(dǎo)的細(xì)胞存活，凋亡和壞死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：該圖引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??１．１．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信號通路??每時每刻，細(xì)胞都需要不斷地對外界刺激作出應(yīng)答，并且它們有著一套復(fù)??雜的機(jī)制來接外界的信號。憐酸化（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）在調(diào)控蛋白功能和信號??轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)中最為常見，并在細(xì)胞周期，生長以及細(xì)胞凋亡中至關(guān)重要。磷??酸化之所以被青睞，很大程度上是因?yàn)樗陌l(fā)生是很迅速的，并且可以通過去??磷酸化的方式解除信號。磷酸化的重要性早己熟知于眾，但由于在本文中不作??重點(diǎn)，所以僅簡要的闡述磷酸化過程。磷酸化和大多數(shù)修飾與眾不同的地方就??在于它的可逆性

—丨曹一Ａ?７７??二龜??Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９?—１：．．?一丨??Ａｃｔｉｕ?｜—＞—［４３??圖３．１?ＴＡＫ１影響ＴＡＢ２蛋白表達(dá)下降??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＴＡＢ２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｔｏ?ＴＡＫ１??注：分別往６個１〇！？１１的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，接種密度為２乂１０６個細(xì)胞／盤的１１￡尺２９３１＇細(xì)胞。待達(dá)到７５％的??細(xì)胞密度時，進(jìn)行轉(zhuǎn)染■分別（順序如圖，從左往右）（１）轉(zhuǎn)入ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ，（２）共轉(zhuǎn)染ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ，（３）ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－１－３２１，（４）?ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ??和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－３２２－４６１，?（５）?ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９，（６）共轉(zhuǎn)染?ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ和ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ。轉(zhuǎn)染８ｈ后，更換新的ＤＭＥＭ培養(yǎng)基（含１０°／。胎牛血清）。待轉(zhuǎn)染后??２４?ｈ?收集細(xì)胞，裂解細(xì)胞并跑?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，最后，用?Ａｎｔｉ－Ｍｙｃ?（Ｓａｎｔａ－ｃｒｕｚ）抗體和?Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ?（Ｓｉｇｍａ－Ｍ２）??抗體進(jìn)行ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。??３．１．２?ＭＧ１３２處理后ＴＡＢ２蛋白表達(dá)升高??為了進(jìn)一步探宄ＴＡＢ２與ＴＡＫ１結(jié)合后，ＴＡＢ２蛋白信號的減弱是否是由于??蛋白降解造成的
【參考文獻(xiàn)】

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1 ;Molecular mechanism of TNF signaling and beyond[J];Cell Research;2005年01期

本文編號：2840795