發(fā)布時間：2020-10-10 01:13

　　 研究背景隨著社會的發(fā)展和物質(zhì)生活水平的提高,越來越多的人患有糖尿病,2014年患有糖尿病的成年人數(shù)達到4.22億,糖尿病成為了一個危害人類健康的慢性非傳染性疾病。雖然對糖尿病發(fā)生的機制有了更多的認識,但目前還沒有能根治糖尿病的方法,每年死于糖尿病的人數(shù)達到150萬,除此之外還有220萬人死于糖尿病引起的并發(fā)癥。糖尿病對患者造成傷害的同時,也對各國的經(jīng)濟造成巨大的損失,越來越受到關(guān)注和重視。實驗動物在糖尿病的研究中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。實驗小型豬由于與人類在器官形態(tài)、生理學功能等多個方面極其相似,所以非常適合用于糖尿病的研究。在實驗小型豬的培育過程中,我們發(fā)現(xiàn)了一頭具有高血糖表現(xiàn)的巴馬小型豬公豬,以該公豬作為種公豬,通過近親交配的方式來進行家系的組建,現(xiàn)在已經(jīng)選育至第五代,經(jīng)檢測其部分后代也同樣具有高血糖的表現(xiàn)。我們認為該巴馬小型豬高血糖家系有望進一步繁殖和選育成為研究糖尿病的動物模型,可以用于糖尿病機制和治療的研究。目的和意義本課題的主要目的是對巴馬小型豬高血糖家系的多項血液指標進行檢測和分析,并嘗試應用高血糖小型豬建立糖尿病模型。同時,對相關(guān)的基因進行分析,以期尋找到造成高血糖的基因突變。研究方法1.高血糖小型豬的指標檢測:選取高血糖家系第五代巴馬小型豬10只和正常巴馬小型豬10只,分別作為高血糖家系組和正常組。于6月齡進行實驗,在空腹狀態(tài)下檢測兩組的體重、空腹血糖、餐后2h血糖、胰島素、胰高血糖素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、血液生理指標和血液生化指標,并進行靜脈葡萄糖耐量試驗,對兩組的檢測結(jié)果進行比較分析。2.高糖高脂高膽固醇飲食誘導實驗:選取高血糖家系第五代巴馬小型豬6只,給與高糖高脂高膽固醇飲食,作為家系+HSFCD組;另外選取正常巴馬小型豬12只,隨機選取其中6只給與高糖高脂高膽固醇飲食,作為正常+HSFCD組,另外6只給與正常飲食,作為正常+CD組。飲食誘導期為4個月,期間對三組的體重、空腹血糖、餐后2h血糖、胰島素、胰高血糖素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、血液生理指標和血脂四項指標進行檢測,并進行靜脈葡萄糖耐量試驗,對三組的檢測結(jié)果進行比較分析。3.TCF7L2基因和PPAR-α基因多態(tài)性分析:選取高血糖家系巴馬小型豬15只和正常巴馬小型豬15只,分別作為高血糖家系組和正常組。采集巴馬小型豬的耳組織用于提取基因組DNA,對TCF7L2基因的外顯子8和PPAR-cα基因的外顯子2片段進行PCR擴增,對擴增產(chǎn)物進行序列測定,分析目的片段的單核苷酸多態(tài)性,對兩組的結(jié)果進行比較分析。結(jié)果1.高血糖家系組的空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇比正常組的高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);靜脈葡萄糖耐量試驗結(jié)果中,高血糖家系組的空腹血糖、30min血糖水平、120min血糖水平比正常組的高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);兩組的血液生理檢測結(jié)果和其余血液生化檢測結(jié)果差異不明顯。2.經(jīng)過4個月的飲食誘導后,家系+HSFCD組的體重增長明顯而且體型變得肥胖,空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)和血脂四項的水平上升,胰島素和胰高血糖素的分泌減少,同時糖耐量出現(xiàn)減低。正常+HSFCD組同樣表現(xiàn)出體型肥胖和血脂四項水平上升,空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)和糖耐量變化不明顯,胰島素分泌增加,紅細胞平均體積增大。正常+CD組的各項指標一直保持在正常的水平。3.TCF7L2基因目的片段的測序結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)了 3個SNP位點,分別為118bp:A→T、220bp:G→A、448bp:G-→A,其中220A/A基因型和448A/A基因型只在高血糖家系組中出現(xiàn),兩組的基因型分布差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。PPAR-α基因目的片段的測序結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)了 3個SNP位點,分別為117bp:C→T、381bp:A→G、417bp:C-→T,兩組的基因型分布差異均無統(tǒng)計學意義。結(jié)論巴馬小型豬高血糖家系的個體表現(xiàn)出高血糖癥狀和脂類代謝異常。在高糖高脂高膽固醇的飲食情況下,其高血糖癥狀表現(xiàn)得更為嚴重,同時糖耐量出現(xiàn)了減低,部分個體已經(jīng)發(fā)展為糖尿病,與正常的巴馬小型豬相比,對高熱量飲食的刺激更為敏感。TCF7L2基因和PPAR-α基因中發(fā)現(xiàn)的多態(tài)性突變未能確定是否與高血糖家系的遺傳性高血糖相關(guān)聯(lián)。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R587.1;R-332
【部分圖文】：

豬資源進行開發(fā)。在實驗小型豬的培育過程中，我們發(fā)現(xiàn)了一頭具有高血糖表現(xiàn)逡逑的巴馬小型豬公豬２９０７，以該２９０７公豬作為種公豬，通過回交和橫交的近親交配逡逑方式來進行家系的組建，現(xiàn)在已經(jīng)繁殖選育至第五代（圖１）。對這只種公豬的后逡逑代進行檢測，發(fā)現(xiàn)其部分后代也表現(xiàn)出高血糖的癥狀。通過長期監(jiān)測，該高血糖逡逑家系中部分個體的空腹血糖值可以達到７．邋Ｏｍｍｏｌ／Ｌ或者以上，而同一環(huán)境中正常逡逑巴馬小型豬個體的空腹血糖值只有２．邋５－３．邋５ｍｍ0ｌ／Ｌ的水平。第五代個體的高血糖逡逑性狀比以往幾代的表現(xiàn)得更加顯著，５０％以上的第五代個體血糖值穩(wěn)定在逡逑６．邋Ｏｍｍｏｌ／Ｌ以上。我們希望通過進一步的繁殖和選育，該巴馬小型豬高血糖家系逡逑的個體能成為研宄糖尿病的動物模型。所以，本課題的主要目的是對巴馬小型豬逡逑高血糖家系的多項血液指標進行檢測和分析，并嘗試應用高血糖小型豬建立糖逡逑尿病模型。同時，對相關(guān)的基因進行分析，以期尋找到造成高血糖的基因突

．７數(shù)據(jù)分析逡逑所有數(shù)據(jù)用ｆ邋±ｓ表示，以０５為檢驗水準，采用雙側(cè)檢驗方法對行單因素方差分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計過程使用ＳＰＳＳ１９．邋０軟件完成。逡逑結(jié)果逡逑體重及體型變化逡逑在４個月的飲食誘導期間，家系＋ＨＳＦＣＤ組和正常＋ＨＳＦＯＴ組的體重增長２０ｋｇX棾さ劍擔矗耄紓歡＃茫淖櫚奶逯卦齔ぴ蚪銜轎齲櫻玻埃�？濤Zさ劍吵＃齲櫻疲茫淖樵詰冢場ⅲ錘鱸碌奶逯乇日＃茫淖櫚母擼鉅煊型臣疲耍埃埃保�；枷亾｝x櫻疲茫淖楹駝＃齲櫻疲茫淖槊扛鱸碌奶逯夭鉅煬尥臣仆煎澹玻保ｅ義希叮擔埃板義

本文編號：2834498