研究背景隨著社會(huì)的發(fā)展和物質(zhì)生活水平的提高,越來(lái)越多的人患有糖尿病,2014年患有糖尿病的成年人數(shù)達(dá)到4.22億,糖尿病成為了一個(gè)危害人類(lèi)健康的慢性非傳染性疾病。雖然對(duì)糖尿病發(fā)生的機(jī)制有了更多的認(rèn)識(shí),但目前還沒(méi)有能根治糖尿病的方法,每年死于糖尿病的人數(shù)達(dá)到150萬(wàn),除此之外還有220萬(wàn)人死于糖尿病引起的并發(fā)癥。糖尿病對(duì)患者造成傷害的同時(shí),也對(duì)各國(guó)的經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失,越來(lái)越受到關(guān)注和重視。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在糖尿病的研究中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。實(shí)驗(yàn)小型豬由于與人類(lèi)在器官形態(tài)、生理學(xué)功能等多個(gè)方面極其相似,所以非常適合用于糖尿病的研究。在實(shí)驗(yàn)小型豬的培育過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)了一頭具有高血糖表現(xiàn)的巴馬小型豬公豬,以該公豬作為種公豬,通過(guò)近親交配的方式來(lái)進(jìn)行家系的組建,現(xiàn)在已經(jīng)選育至第五代,經(jīng)檢測(cè)其部分后代也同樣具有高血糖的表現(xiàn)。我們認(rèn)為該巴馬小型豬高血糖家系有望進(jìn)一步繁殖和選育成為研究糖尿病的動(dòng)物模型,可以用于糖尿病機(jī)制和治療的研究。目的和意義本課題的主要目的是對(duì)巴馬小型豬高血糖家系的多項(xiàng)血液指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)和分析,并嘗試應(yīng)用高血糖小型豬建立糖尿病模型。同時(shí),對(duì)相關(guān)的基因進(jìn)行分析,以期尋找到造成高血糖的基因突變。研究方法1.高血糖小型豬的指標(biāo)檢測(cè):選取高血糖家系第五代巴馬小型豬10只和正常巴馬小型豬10只,分別作為高血糖家系組和正常組。于6月齡進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在空腹?fàn)顟B(tài)下檢測(cè)兩組的體重、空腹血糖、餐后2h血糖、胰島素、胰高血糖素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、血液生理指標(biāo)和血液生化指標(biāo),并進(jìn)行靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn),對(duì)兩組的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析。2.高糖高脂高膽固醇飲食誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn):選取高血糖家系第五代巴馬小型豬6只,給與高糖高脂高膽固醇飲食,作為家系+HSFCD組;另外選取正常巴馬小型豬12只,隨機(jī)選取其中6只給與高糖高脂高膽固醇飲食,作為正常+HSFCD組,另外6只給與正常飲食,作為正常+CD組。飲食誘導(dǎo)期為4個(gè)月,期間對(duì)三組的體重、空腹血糖、餐后2h血糖、胰島素、胰高血糖素、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、血液生理指標(biāo)和血脂四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),并進(jìn)行靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn),對(duì)三組的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析。3.TCF7L2基因和PPAR-α基因多態(tài)性分析:選取高血糖家系巴馬小型豬15只和正常巴馬小型豬15只,分別作為高血糖家系組和正常組。采集巴馬小型豬的耳組織用于提取基因組DNA,對(duì)TCF7L2基因的外顯子8和PPAR-cα基因的外顯子2片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列測(cè)定,分析目的片段的單核苷酸多態(tài)性,對(duì)兩組的結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果1.高血糖家系組的空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)、膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇比正常組的高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);靜脈葡萄糖耐量試驗(yàn)結(jié)果中,高血糖家系組的空腹血糖、30min血糖水平、120min血糖水平比正常組的高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);兩組的血液生理檢測(cè)結(jié)果和其余血液生化檢測(cè)結(jié)果差異不明顯。2.經(jīng)過(guò)4個(gè)月的飲食誘導(dǎo)后,家系+HSFCD組的體重增長(zhǎng)明顯而且體型變得肥胖,空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)和血脂四項(xiàng)的水平上升,胰島素和胰高血糖素的分泌減少,同時(shí)糖耐量出現(xiàn)減低。正常+HSFCD組同樣表現(xiàn)出體型肥胖和血脂四項(xiàng)水平上升,空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血紅蛋白、胰島素抵抗指數(shù)和糖耐量變化不明顯,胰島素分泌增加,紅細(xì)胞平均體積增大。正常+CD組的各項(xiàng)指標(biāo)一直保持在正常的水平。3.TCF7L2基因目的片段的測(cè)序結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)了 3個(gè)SNP位點(diǎn),分別為118bp:A→T、220bp:G→A、448bp:G-→A,其中220A/A基因型和448A/A基因型只在高血糖家系組中出現(xiàn),兩組的基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。PPAR-α基因目的片段的測(cè)序結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)了 3個(gè)SNP位點(diǎn),分別為117bp:C→T、381bp:A→G、417bp:C-→T,兩組的基因型分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論巴馬小型豬高血糖家系的個(gè)體表現(xiàn)出高血糖癥狀和脂類(lèi)代謝異常。在高糖高脂高膽固醇的飲食情況下,其高血糖癥狀表現(xiàn)得更為嚴(yán)重,同時(shí)糖耐量出現(xiàn)了減低,部分個(gè)體已經(jīng)發(fā)展為糖尿病,與正常的巴馬小型豬相比,對(duì)高熱量飲食的刺激更為敏感。TCF7L2基因和PPAR-α基因中發(fā)現(xiàn)的多態(tài)性突變未能確定是否與高血糖家系的遺傳性高血糖相關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R587.1;R-332
【部分圖文】：

豬資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)。在實(shí)驗(yàn)小型豬的培育過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)了一頭具有高血糖表現(xiàn)逡逑的巴馬小型豬公豬２９０７，以該２９０７公豬作為種公豬，通過(guò)回交和橫交的近親交配逡逑方式來(lái)進(jìn)行家系的組建，現(xiàn)在已經(jīng)繁殖選育至第五代（圖１）。對(duì)這只種公豬的后逡逑代進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其部分后代也表現(xiàn)出高血糖的癥狀。通過(guò)長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)，該高血糖逡逑家系中部分個(gè)體的空腹血糖值可以達(dá)到７．邋Ｏｍｍｏｌ／Ｌ或者以上，而同一環(huán)境中正常逡逑巴馬小型豬個(gè)體的空腹血糖值只有２．邋５－３．邋５ｍｍ0ｌ／Ｌ的水平。第五代個(gè)體的高血糖逡逑性狀比以往幾代的表現(xiàn)得更加顯著，５０％以上的第五代個(gè)體血糖值穩(wěn)定在逡逑６．邋Ｏｍｍｏｌ／Ｌ以上。我們希望通過(guò)進(jìn)一步的繁殖和選育，該巴馬小型豬高血糖家系逡逑的個(gè)體能成為研宄糖尿病的動(dòng)物模型。所以，本課題的主要目的是對(duì)巴馬小型豬逡逑高血糖家系的多項(xiàng)血液指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)和分析，并嘗試應(yīng)用高血糖小型豬建立糖逡逑尿病模型。同時(shí)，對(duì)相關(guān)的基因進(jìn)行分析，以期尋找到造成高血糖的基因突

．７數(shù)據(jù)分析逡逑所有數(shù)據(jù)用ｆ邋±ｓ表示，以０５為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，采用雙側(cè)檢驗(yàn)方法對(duì)行單因素方差分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)過(guò)程使用ＳＰＳＳ１９．邋０軟件完成。逡逑結(jié)果逡逑體重及體型變化逡逑在４個(gè)月的飲食誘導(dǎo)期間，家系＋ＨＳＦＣＤ組和正常＋ＨＳＦＯＴ組的體重增長(zhǎng)２０ｋｇX棾さ劍擔(dān)矗耄紓歡＃茫淖櫚奶逯卦齔ぴ蚪銜轎齲櫻玻埃耄繚齔さ劍吵＃齲櫻疲茫淖樵詰冢場(chǎng)ⅲ錘鱸碌奶逯乇日＃茫淖櫚母擼鉅煊型臣疲耍埃埃保�；枷亾�(dān)齲櫻疲茫淖楹駝＃齲櫻疲茫淖槊扛鱸碌奶逯夭鉅煬尥臣仆煎澹玻保ｅ義希叮擔(dān)埃板義

本文編號(hào)：2834498