本文關(guān)鍵詞：斑馬魚牙齒再生模型的構(gòu)建及其初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牙齒是消化系統(tǒng)的重要組成部分,此外還兼顧發(fā)音和美觀功能。牙齒缺失是先天或后天因素導(dǎo)致的牙齒發(fā)育障礙或脫落,該疾病雖不致命但會(huì)嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。除了乳恒牙替換階段,一旦牙齒缺失將無法自行修復(fù)再生。傳統(tǒng)的修復(fù)方式雖然能恢復(fù)部分牙齒形態(tài)和功能,但是和天然牙齒相比仍存在著較大的差距。近些年來隨著人們對(duì)牙齒的自我保健意識(shí)的增強(qiáng),“第三副牙齒”已成為人們殷切的期盼。牙齒再生因重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值而成為研究的熱點(diǎn)。目前,牙齒發(fā)育及再生的首選模式動(dòng)物多局限于小鼠等哺乳動(dòng)物,近年的研究使我們對(duì)牙齒的早期發(fā)育、組織分化及器官的構(gòu)建有一定程度的了解。然而哺乳類模式生物有著自身的局限性,其胚胎發(fā)育和分化過程中所涉及的調(diào)控機(jī)制難以獲得深入研究。斑馬魚具有深入探究機(jī)體發(fā)育調(diào)控分子機(jī)制的獨(dú)特優(yōu)勢(shì),是研究牙齒發(fā)育和再生的新興模式生物。特異性損傷模型主要基于Mtz/NTR系統(tǒng)。通過構(gòu)建重組轉(zhuǎn)基因系,使細(xì)胞特異性表達(dá)硝基還原酶(NTR)。 Mtz/NTR系統(tǒng)特異性損傷的原理是特異性表達(dá)NTR的組織在甲硝噠唑(Mtz)作用下,NTR被NADH或NADPH還原后與Mtz結(jié)合,將無毒性的Mtz轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒性的代謝物,從而特異性導(dǎo)致表達(dá)NTR的細(xì)胞死亡。目的構(gòu)建斑馬魚器官模型,利用Mtz/NTR系統(tǒng)造成牙胚特異性損傷,觀測(cè)損傷后有無再生現(xiàn)象,為后期前體細(xì)胞的定位追蹤提供條件。方法本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建pBluescript Ⅱ-dlx2b-Dendra2-NTR重組質(zhì)粒將斑馬魚牙胚的特異性啟動(dòng)子dlx2b連接到Dendra2-NTR的上游,從而使牙胚細(xì)胞能夠特異性表達(dá)細(xì)菌的硝基還原酶(NTR)并呈現(xiàn)綠色熒光。運(yùn)用顯微注射技術(shù)向單細(xì)胞期的斑馬魚胚胎動(dòng)物極內(nèi)注射重組質(zhì)粒,重組質(zhì)粒將隨機(jī)整合到斑馬魚基因組內(nèi),經(jīng)數(shù)代繁育篩選獲得能夠穩(wěn)定遺傳的dlx2b:Dendra2-NTR轉(zhuǎn)基因斑馬魚系。利用Mtz/NTR系統(tǒng)對(duì)其造成牙胚特異性損傷。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了斑馬魚牙胚特異性定位損傷模型。選用72hpf-96hpf時(shí)期的dlx2b:Dendra2-NTR轉(zhuǎn)基因斑馬魚作為Mtz作用起始時(shí)間點(diǎn),經(jīng)驗(yàn)證用12mM Mtz處理24小時(shí)后,相比對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組的胚胎牙胚熒光明顯減弱,繼續(xù)處理達(dá)48小時(shí)后,運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡未發(fā)現(xiàn)殘存牙胚細(xì)胞。撤去Mtz,經(jīng)過48小時(shí)的恢復(fù)可看到明顯的牙齒再生現(xiàn)象。結(jié)論實(shí)驗(yàn)證明所建立的dlx2b:Dendra2 NTR轉(zhuǎn)基因斑馬魚系能夠特異性損傷牙胚,撤除藥物后損傷的牙胚能夠再生。可用于牙齒再生過程中細(xì)胞來源的定位追蹤和相關(guān)分子機(jī)理機(jī)制的探索。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 牙齒 損傷修復(fù) Mtz/NTR系統(tǒng) 轉(zhuǎn)基因系Tg(dlx2b:Dendra2-NTR)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R78;R-332
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-15
• 1 材料與方法15-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-31
• 2 結(jié)果31-42
• 2.1 pBluescript Ⅱ-KS-dlx2b-Dendra2-NTR的構(gòu)建31-35
• 2.2 斑馬魚胚胎注射轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒結(jié)果35-36
• 2.3 Mtz/NTR系統(tǒng)特異性介導(dǎo)斑馬魚牙齒的損傷36-37
• 2.4 Mtz/NTR系統(tǒng)特異性介導(dǎo)斑馬魚牙胚損傷后可以再生37-40
• 2.5 撤去Mtz后斑馬魚損傷牙胚的再生存在差異40-42
• 3 討論42-46
• 3.1 斑馬魚牙齒特異性損傷模型的建立42-43
• 3.2 損傷時(shí)間和損傷模式的選擇43-44
• 3.3 損傷后斑馬魚牙齒再生差異的分析44
• 3.4 斑馬魚牙胚再生來源的來源猜測(cè)44-45
• 3.5 進(jìn)一步的研究方向45-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 文獻(xiàn)綜述51-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-59
• 碩士期間發(fā)表的論文59

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本文編號(hào)：282979