目的:目前越來越多的證據(jù)顯示干細胞是通過旁分泌/內(nèi)分泌的作用促進急性腎損傷的修復(fù)。如果其保護作用是通過內(nèi)分泌的作用,那么注射干細胞條件培養(yǎng)液應(yīng)該可以取得良好效果,但目前關(guān)于此研究結(jié)論仍不統(tǒng)一。方法:本試驗中我們通過培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞然后將其通過尾靜脈注射的方法注入到缺血再灌注模型鼠體內(nèi),同時將條件培養(yǎng)液注入到小鼠的體內(nèi),在不同時間點檢測病理的改變,細胞增生情況和管周毛細血管的減少來比較骨髓間充質(zhì)干細胞和條件培養(yǎng)液對模型鼠的作用。結(jié)果:顯示骨髓間充質(zhì)干細胞注入改善了腎功能及腎臟病理的改變,明顯降低了死亡率。骨髓間充質(zhì)干細胞同時也促進了腎臟微血管的修復(fù),減輕了管周毛細血管的丟失增加了實質(zhì)細胞的增生,減少了單核-巨噬細胞的浸潤,減少了凋亡細胞的數(shù)量。雖然我們鑒定出條件培養(yǎng)液中含有促進血管再生的細胞因子,包括肝細胞生長因子,血管內(nèi)皮生長因子和胰島素樣生長因子,但是在損傷修復(fù)的整個階段我們并沒有發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)液有任何的促進作用。結(jié)論:在本試驗中的數(shù)據(jù)顯示骨髓間充質(zhì)干細胞的注入可以促進腎臟的修復(fù),可以促進管周毛細血管和腎小管上皮細胞的再生。雖然,骨髓間充質(zhì)干細胞可以分泌大量的促血管生長因子,但是條件培養(yǎng)液并沒有顯示出明顯的促腎臟修復(fù)的作用,提示骨髓間充質(zhì)干細胞可能是通過旁分泌的機制而不是內(nèi)分泌的機制起到腎臟保護作用的。本試驗的結(jié)果提示在腎臟受損之后骨髓間充質(zhì)干細胞可以提供一個良好的治療手段。
【學(xué)位單位】：哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R692;R-332
【部分圖文】：

圖 1. MSCs 形態(tài)，流式細胞檢測結(jié)果及誘導(dǎo)分化。(A)光鏡顯示 MSCs 具有典型的梭形的形態(tài), 放大 100 倍. (B)顯微共聚焦 CMFDA 染色是典型的梭形形態(tài)，標尺 50um. (C) 流式細胞分析顯示培養(yǎng)的 MSCs 表達 CD73，CD90，CD105，CD44 陽性，而-CD45，CD11b 及 CD34陰性。(D)茜素紅，堿性磷酸酶及油紅 O 染色證實 MSCs 可以分化為脂肪細胞和骨細胞。Figure 1. The MSC phenotype,flow cytometry graphs and differentiation abilit(A). Light microscopy revealed that the MSCs had a spindle shape. MagnificationX100. (B).Confocal image of MSCs exhibit the typical morphology (Bars, 50Bm)(C)Flow cytometry analysis of one representative MSC population stained witanti-CD73, CD90, CD105, CD44, CD45, CD11b and CD34 monoclonal antibodies.(D)OiRed O staining determined differentiation to adipocytes. Alizarin Red S was useto show differentiation to osteocytes. Alkaline phosphatase staining also confirmedifferentiation to osteocytes.

30圖.2. CMFDA 染色的 MSCs 在腎臟的數(shù)目比較。(A- C)顯示了實驗的 3,5,7 天 MSCs 到達受損腎臟的情況(D)第3天招募到右腎的MSCs。(E)柱形圖顯示了3,5,7天左腎及右腎MSCs隨時間變化。以均數(shù)±標準差表示,#P < 0.01 與右腎比較(n=6)Fig.2. CMFDA labeled  MSCs recruited to the injured kidney. (A-C).Representative confocal image of day 3 ,5,7 post I/R injury kidney after intravenoustransfer of MSCs showing the CMFDA labeled-MSCs detected in left kidney (arrowheads).

d-MSCs detected in right kidney on days 3. (E) Graph indicating the nbeled-MSCs identified in left and right kidney with time post I/R inan values±SD.#P<0.01,vs.right kidney (Bars, 50Bm).件培養(yǎng)液中含有 HGF, VEGF-A and IGF-1證 MSCs 促進急性腎衰竭修復(fù)的機制，檢測骨髓間充質(zhì)干細胞是臟修復(fù)的生長因子，我們使用 ELISA 方法測定了 CM 中的 IGF-1，結(jié)果發(fā)現(xiàn) MSCs 可以分泌 HGF, VEGF-A 和 IGF-1，CM 分時，48 小時和 72 小時，不同時間點之間沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異，我們可以設(shè)想 CM 可能具有促進腎臟衰竭修復(fù)的作用，在實驗可能也有明顯的作用。

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本文編號：2829324