目的:本研究試圖探索IBD幼鼠模型中miR-7、TFF3基因及蛋白的表達情況及相關(guān)性,且試圖通過抑制miR-7的表達觀測TFF3的表達情況,闡明mi R-7在IBD動物模型中對腸黏膜保護因子TFF3的調(diào)控作用。研究方法:本研究選用60只生后3-4周的雄性SD大鼠,完全隨機分為模型組、對照組及正常對照組,應用TNBS建立炎癥性腸病幼鼠模型,觀測各組幼鼠臨床表現(xiàn),進行疾病活動指數(shù)評分,通過HE染色觀察腸道炎癥改變并進行結(jié)腸組織損傷評分,證實結(jié)腸炎存在,采用Real-time RT-PCR方法檢測mi R-7與TFF3基因的表達情況,探索miR-7和TFF3在IBD幼鼠模型結(jié)腸組織中表達的差異性和相關(guān)性;選用40只生后21天的Balb/c小鼠,隨機分為模型組、對照組、miR抑制組及rTFF3干預組,應用TNBS建立IBD模型,以miRNA-antagomir抑制miR-7的表達,并以rTFF3作為陽性對照,通過比較各組幼鼠結(jié)腸組織損傷程度、mi R-7和TFF3基因的表達情況及腸組織中TFF3蛋白的表達情況,明確miR-7對TFF3的調(diào)控作用。結(jié)果:TNBS誘導的IBD幼鼠在造模后出現(xiàn)體重明顯下降,疾病活動指數(shù)及病理損傷評分顯著升高,并且隨著時間的改變體重先降后升,DAI和病理評分呈先高后降的趨勢,與正常對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。Real-time RT-PCR結(jié)果表明IBD幼鼠結(jié)腸組織中miR-7高表達,TFF3低表達,且隨著時間的改變miR-7的表達逐漸降低,TFF3的表達逐漸增強,二者之間負相關(guān),抑制miR-7的表達后可以上調(diào)TFF3表達水平。免疫組化及Western Blot結(jié)果提示IBD幼鼠腸組織中TFF3蛋白的表達量顯著降低,抑制miR-7的表達后TFF3蛋白的表達量顯著升高,與對照組和rTFF3干預組相比有統(tǒng)計學差異。結(jié)論:1、IBD動物模型中miR-7高表達,TFF3低表達,且隨著時間的進展miR-7的表達逐漸降低,TFF3的表達逐漸增強,二者呈負相關(guān)。2、抑制miR-7的表達后,腸組織TFF3基因及蛋白表達增加,證實miR-7對TFF3的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。
【學位單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R574;R-332
【部分圖文】：

3.1 TNBS 誘導 IBD 幼鼠模型的成功建立3.1.1 TNBS 誘導 SD 大鼠幼鼠 IBD 的臨床表觀評估造模前：幼鼠進食水正常，毛色光潔干凈，喜自主活動，大小便正常，糞便性狀正常，黃褐色，呈橢圓形。造模后：TNBS 組幼鼠出黏液血便或稀便，肛周污穢，與正常糞便差別明顯；動物自主活動少，喜貼邊扎堆，食欲減退，倦怠懶動。IBD 幼鼠出現(xiàn)腹瀉及血便等臨床表現(xiàn)，體重下降，到造模后第 3 天開始出現(xiàn)體重增長，但增長幅度明顯低于 NS 組和 Ethanol 組（圖 1A，p＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義）。隨著體重下降、血便等出現(xiàn)，幼鼠的疾病活動指數(shù)（DAI）急劇上升，隨著病程的進展，TNBS 組幼鼠臨床癥狀逐漸緩解，DAI 指數(shù)開始出現(xiàn)下降，而 NS 組和 Ethanol 組的 DAI 評分均低于 TNBS 組，到造模第 7 天三組幼鼠的 DAI基本相同（圖 1B，p＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義）。

3.1 TNBS 誘導 IBD 幼鼠模型的成功建立3.1.1 TNBS 誘導 SD 大鼠幼鼠 IBD 的臨床表觀評估造模前：幼鼠進食水正常，毛色光潔干凈，喜自主活動，大小便正常，糞便性狀正常，黃褐色，呈橢圓形。造模后：TNBS 組幼鼠出黏液血便或稀便，肛周污穢，與正常糞便差別明顯；動物自主活動少，喜貼邊扎堆，食欲減退，倦怠懶動。IBD 幼鼠出現(xiàn)腹瀉及血便等臨床表現(xiàn)，體重下降，到造模后第 3 天開始出現(xiàn)體重增長，但增長幅度明顯低于 NS 組和 Ethanol 組（圖 1A，p＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義）。隨著體重下降、血便等出現(xiàn)，幼鼠的疾病活動指數(shù)（DAI）急劇上升，隨著病程的進展，TNBS 組幼鼠臨床癥狀逐漸緩解，DAI 指數(shù)開始出現(xiàn)下降，而 NS 組和 Ethanol 組的 DAI 評分均低于 TNBS 組，到造模第 7 天三組幼鼠的 DAI基本相同（圖 1B，p＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義）。

圖 3 IBD 大鼠幼鼠結(jié)腸組織病理改變隨時間變化（HE ×100）圖中 A 代表 TNBS 組造模后第 1 天，B 代表 TNBS 組造模后第 3 天，C 代表 TNBS 組造模后第 5 天，D 代表 TNBS 組造模后第 7 天，圖中各組數(shù)據(jù)均以均數(shù) 標準誤表示（n=5），*表示P<0.05，有統(tǒng)計學意義。3.2 miR-7 對 TFF3 的調(diào)控作用3.2.1 幼鼠結(jié)腸組織病理學改變光鏡下觀察幼鼠結(jié)腸組織，TNBS 組的幼鼠結(jié)腸表現(xiàn)出明顯腸道炎癥，腸上皮及隱窩結(jié)構(gòu)破壞甚至消失，大量的炎性細胞浸潤，病變深及粘膜和粘膜下層；miR抑制組結(jié)腸組織可見腸上皮基本完整，隱窩結(jié)構(gòu)恢復正常或輕度損害，伴有大量的杯狀細胞增生，少有腸黏膜上皮細胞的缺失，可見有散在的炎癥細胞浸潤；rTFF3干預組腸上皮恢復正常，仍可見有炎癥細胞聚集和隱窩損害，經(jīng)單因素方差分析統(tǒng)計，各組幼鼠病理學評分差異有統(tǒng)計學意義（圖 4，P＜0.05），TNBS 組病理評

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Rui Tian;Rui-Lan Wang;Hui Xie;Wei Jin;Kang-Long Yu;;Overexpressed miRNA-155 dysregulates intestinal epithelial apical junctional complex in severe acute pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2013年45期

2 Mehmet Coskun;Jacob Tveiten Bjerrum;Jakob Benedict Seidelin;Ole Haagen Nielsen;;MicroRNAs in inflammatory bowel disease-pathogenesis,diagnostics and therapeutics[J];World Journal of Gastroenterology;2012年34期

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本文編號：2818401