本文關(guān)鍵詞：NM23在肝細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分；NM23-E2過(guò)表達(dá)和干擾載體的構(gòu)建、擴(kuò)增、鑒定目的：構(gòu)建、擴(kuò)增、鑒定、篩選NM23-E2過(guò)表達(dá)和干擾載體,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定理論基礎(chǔ)。方法：1.NM23-E2與HPV-16、E6、E7慢病毒構(gòu)建慢病毒載體并測(cè)序；2.重組慢病毒質(zhì)粒的提��；3.構(gòu)建的NM23-E2慢病毒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞：4.Q-PCR檢測(cè)病毒滴度；5.重組的NM23-E2慢病毒感染HEK293T細(xì)胞及篩選；6.NM23-E2 mRNA的RT-PCR檢測(cè)；7.NM23-E2蛋白Western blot檢測(cè)。結(jié)果：成功構(gòu)建NM23-E2過(guò)表達(dá)和干擾慢病毒載體并測(cè)序驗(yàn)證無(wú)誤；通過(guò)轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,測(cè)定病毒滴度； 應(yīng)用Q-PCR、Western-blot檢測(cè)從shRNA1、 shRNA2、shRNA3、shRNA4四個(gè)干擾序列中篩選出干擾效果最佳的shRNA1作為干擾載體。結(jié)論：成功構(gòu)建NM23-E2的慢病毒載體,測(cè)序正確,篩選出干擾效果最佳的干擾載體及高表達(dá)的過(guò)表達(dá)載體。第二部分： NM23-E2在肝細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用目的：研究NM23-E2基因在BRL-3A細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用方法：實(shí)驗(yàn)分五組：1、對(duì)照組(control),未經(jīng)任何處理2、過(guò)表達(dá)組(ExpNM23-E2),轉(zhuǎn)染NM23-E2過(guò)表達(dá)載體；3、過(guò)表達(dá)NC組(Exp NC),轉(zhuǎn)染NM23-E2過(guò)表達(dá)陰性對(duì)照載體,4、干擾NC(shRNA NC),轉(zhuǎn)染NM23-E2干擾陰性對(duì)照載體；5、干擾組(shRNA1),轉(zhuǎn)染NM23-E2干擾載體。將包裝好的上述五種載體分別轉(zhuǎn)染大鼠BRL-3A細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后第五天應(yīng)用Q-PCR檢測(cè)BRL-3A細(xì)胞NM23-E2、PCNA、Cyclin D1 mRNA的表達(dá),應(yīng)用Western-blot檢測(cè)BRL-3A細(xì)胞NM23-E2、PCNA、Cyclin D1蛋白的表達(dá),應(yīng)用CCK8檢測(cè)BRL-3A細(xì)胞轉(zhuǎn)染1-5天后的細(xì)胞增殖情況。結(jié)果：PCR：檢測(cè)BRL-3A細(xì)胞NM23-E2、PCNA、Cyclin D1 mRNA的表達(dá)：NM23-E2過(guò)表達(dá)組三種蛋白mRNA的表達(dá)量均高于空白對(duì)照組(P0.05),shRNA干擾組三種蛋白mRNA的表達(dá)量均低于空白對(duì)照組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western-blot:檢測(cè)BRL-3A細(xì)胞NM23-E2、PCNA、CyclinD1蛋白的表達(dá)：NM23-E2過(guò)表達(dá)組三種蛋白表達(dá)量均高于空白對(duì)照組(P0.05), shRNA干擾組三種蛋白表達(dá)量均低于于空白對(duì)照組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CCK8：檢測(cè)大鼠BRL-3A細(xì)胞增殖情況,NM23-E2過(guò)表達(dá)組細(xì)胞增殖數(shù)目明顯高于空白對(duì)照組和載體NC組細(xì)胞(P0.05),shRNA干擾組細(xì)胞增殖數(shù)目明顯低于空白對(duì)照組和載體NC組細(xì)胞(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：運(yùn)用慢病毒載體攜帶過(guò)表達(dá)及干擾的NM23-E2可有效地轉(zhuǎn)染到BRL-3A細(xì)胞。過(guò)表達(dá)的NM23-E2載體對(duì)BRL-3A細(xì)胞再生調(diào)控作用成正向調(diào)控作用,shRNA載體對(duì)BRL-3A細(xì)胞再生調(diào)控作用成負(fù)向調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：NM23-E2 質(zhì)粒 HEK293T細(xì)胞 轉(zhuǎn)染 Q-PCR Western-blot NM23-E2 干擾 過(guò)表達(dá) BRL-3A 細(xì)胞 CCK8
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 第一部分：NM23-E2過(guò)表達(dá)和干擾載體的構(gòu)建、擴(kuò)增、鑒定11-39
• 前言11-12
• 材料和方法12-27
• 結(jié)果27-34
• 討論34-36
• 小結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 第二部分：NM23-E2在肝細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用39-60
• 前言39-40
• 材料和方法40-47
• 結(jié)果47-54
• 討論54-57
• 小結(jié)57-58
• 參考文獻(xiàn)58-60
• 綜述60-64
• 參考文獻(xiàn)63-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張谷裕;劉國(guó)華;林滿洲;李明意;楊永光;許浩;;維生素K2促進(jìn)大鼠肝再生模型肝切除術(shù)后肝功能恢復(fù)的研究[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

  本文關(guān)鍵詞：NM23在肝細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：281438