目的:制備HIV-1跨物種快速易感、病毒高效復(fù)制的鼠類細(xì)胞模型。此細(xì)胞模型可用于移植鼠體內(nèi)制備HIV-1感染的鼠類動物模型,以實現(xiàn)HIV-1跨物種鼠類動物模型的感染研究及促進(jìn)HIV-1抗病毒藥物篩選及疫苗制備等研究。方法:首先,應(yīng)用hCD4/hCCR5/hCyclin T1慢病毒感染鼠白血病細(xì)胞株L1210細(xì)胞,實現(xiàn)L1210細(xì)胞高效表達(dá)HIV-1感染所需的受體hCD4、輔助受體hCCR5及Tat蛋白驅(qū)動因子hCyclin T1。其次,HIV-1感染陽性克隆L1210細(xì)胞,通過檢測細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的HIV-1 RNA,驗證陽性克隆L1210細(xì)胞對HIV-1的易感性及病毒復(fù)制情況。最后,將上步驟細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行CEMx174細(xì)胞的感染試驗,以證實HIV-1子病毒是具有感染能力的活病毒。結(jié)果:hCD4/hCCR5/hCyclin T1慢病毒感染L1210細(xì)胞后,L1210細(xì)胞高表達(dá)hCD4、hCCR5和h Cyclin T1 mRNA及相應(yīng)蛋白。HIV-1感染陽性克隆L1210細(xì)胞后,HIV-1 RNA在陽性克隆L1210細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中高表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)上清液感染CEMx174細(xì)胞后,HIV-1 RNA在CEMx174細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)。結(jié)論:本課題成功構(gòu)建了HIV-1跨物種易感的鼠類細(xì)胞模型,此細(xì)胞模型高效表達(dá)HIV-1感染所需的受體hCD4、輔助受體hCCR5和促轉(zhuǎn)錄因子hCyclin T1,使HIV-1能快速感染、病毒高效復(fù)制并分泌出具有感染能力的子代病毒。為下一步HIV-1跨物種感染鼠類動物模型的研究提供了堅實基礎(chǔ),也為HIV/AIDS的發(fā)病機(jī)制、抗病毒藥物篩選及疫苗制備等研究提供了一個新的細(xì)胞模型。
【學(xué)位單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R512.91;R-332
【部分圖文】：

圖 1 不同 MOI 值慢病毒感染 L1210 細(xì)胞的 GFP 表達(dá)率用 MOI 值為 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分別感染 L1210 細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀檢測 L1210 細(xì)胞中的 GFP 熒光比率，MOI 從 50 至 150，細(xì)胞內(nèi) GFP 熒光比率不斷增多，MOI 值從 150 到 450，細(xì)胞內(nèi)的 GFP 熒光比率增加不顯著。因此，慢病毒感染 L1210 細(xì)胞的最佳 MOI 值為 150。Figure 1 The expression rate of GFP in L1210 cells infected with different MOI lentivirusesL1210 cells were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400 and450, and the ratio of GFP fluorescence in L1210 cells was detected by flow cytometry. MOI values from 50to 150, the intracellular GFP fluorescence ratio increased continuously. MOI values from 150 to 450, theintracellular GFP fluorescence ratio did not increase significantly. Therefore, the best MOI value forlentivirus infected L1210 cells was 150.

圖 2 不同 MOI 值的慢病毒對 L1210 細(xì)胞的感染率分析I 值為 0、50、100、150、200、250、300、350、400、450 的慢病分別感染 檢測 L1210 細(xì)胞的 GFP 熒光比率，用折線圖分析不同 MOI 值的慢病毒對 LMOI 從 50 至 150，慢病毒的感染效率大幅度升高，MOI 值從 150 到 450，慢顯著，因此，選取 150 為慢病毒的最佳感染 MOI。ure 2 Analysis of infection efficiency rate of different MOI lentiviruses for L121 were infected with lentivirus with MOI values of 0, 50, 100, 150, 200, 250, 300,e GFP fluorescence ratio of L1210 cells was measured by flow cytometry. Line Cthe infection efficiency of lentivirus tinfected L1210 Cells. MOI values from 5fficiency of lentivirus increased significantly. MOI values from 150 to 450, of lentivirus was not significantly increased. Therefore, 150 was regarded as

結(jié)果如圖 3 所示。結(jié)果表明，隨著天數(shù)的遞增，細(xì)胞增長差異不大（圖3A，p>0.05），細(xì)胞存活率也無差異（圖 3 B，p>0.05）。實驗證明，慢病毒感染后，細(xì)胞的生長及存活未受影響。圖 3 慢病毒感染 L1210 后細(xì)胞數(shù)及存活率分析L1210 空白細(xì)胞、陰性慢病毒感染的 GFP+ L1210 細(xì)胞和陽性慢病毒感染的 GFP+ L1210 細(xì)胞均以 5x104的細(xì)胞數(shù)在 24 孔板上進(jìn)行鋪板培養(yǎng)，每 48 h 重新?lián)Q液，收集第 0、2、4、6、8、10、12、14 天的細(xì)胞，測定細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞存活率，分析數(shù)據(jù)，p>0.05。（A）不同時間各細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)分析。（B）細(xì)胞存活率分析。Figure 3 The analysis of cell number and survival rate after Lentivirus infe

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉方洲;張雪俠;;HIV動物模型在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用及進(jìn)展[J];中醫(yī)研究;2015年06期

2 張高紅,陳亞麗,唐宏,鄭永唐;SCID-hu小鼠:HIV研究的小型動物模型[J];動物學(xué)研究;2004年04期

3 秦人;靈長類動物保護(hù)現(xiàn)狀[J];大自然;2004年01期

本文編號：2809943