【摘要】：目的：采用腺病毒為載體將HBcAg基因負(fù)載正常人和慢性HBV攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后TLR9,IRF7表達(dá)情況,IFN-a產(chǎn)生水平,以了解慢性HBV感染者免疫識(shí)別狀態(tài)的變化。 方法：構(gòu)建攜帶HBcAg基因復(fù)制缺陷型的重組腺病毒,將其轉(zhuǎn)染正常人和慢性HBV攜帶者PBMCs,按分組予高拷貝HBV-DNA血清和(或)CpG-ODN2006刺激,RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后TLR9,IRF7mRNA表達(dá),Western-Blot方法檢測(cè)TLR9,IRF7蛋白表達(dá),Elisa方法檢測(cè)培養(yǎng)液中的IFN-a水平。 結(jié)果： ①RT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染前慢性HBV攜帶組TLR9,IRF7mRNA的表達(dá)低于健康正常者(P0.05),其中,轉(zhuǎn)染前予CpG-ODN2006刺激后HBV攜帶者和健康正常者TLR9,IRF7mRNA表達(dá)未有顯著上升(P0.05)；轉(zhuǎn)染后予CpG--ODN2006刺激HBV攜帶者和健康正常者較轉(zhuǎn)染前TLR9,IRF7mRNA表達(dá)有顯著增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) ②與TLR9,IRF7mRNA表達(dá)一致,Western-Blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后健康正常者予各刺激后較轉(zhuǎn)染前TLR9,IRF7蛋白表達(dá)增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),慢性HBV攜帶者轉(zhuǎn)染后較轉(zhuǎn)染前TLR9,IRF7蛋白表達(dá)增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 ③Elisa結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染前后慢性HBV攜帶組IFN-α產(chǎn)生水平低于健康對(duì)照組(P0.05,P0.05),健康正常者及慢性HBV攜帶者轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)上清IFN-a產(chǎn)生水平較轉(zhuǎn)染前明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： ①轉(zhuǎn)染前慢性HBV感染者PBMCs TLR9,IRF7mRNA及蛋白表達(dá),IFN-a產(chǎn)生水平顯著低于健康正常者,提示慢性HBV感染者PBMCs識(shí)別HBV核酸DNA能力下降,不能有效激活I(lǐng)RF7,不能分泌足量的IFN-α清除病毒造成慢性持續(xù)感染可能； ②Ad-HBcAg轉(zhuǎn)染慢性HBV攜帶者PBMCs后IFN-a產(chǎn)生水平低于健康對(duì)照組轉(zhuǎn)染后IFN-a產(chǎn)生水平,提示HBV持續(xù)感染與PBMCs免疫功能下降有關(guān)； ③Ad-HBcAg轉(zhuǎn)染PBMCs后TLR9,IRF7mRNA及蛋白的表達(dá)及IFN-α的分泌水平較未轉(zhuǎn)染前增強(qiáng)證實(shí)了TLR9為胞內(nèi)受體,予胞內(nèi)刺激可產(chǎn)生較強(qiáng)的抗HBV免疫； ④轉(zhuǎn)染后CpG-ODN可激活慢性HBV攜帶者PBMCs中TLR9,IRF7的表達(dá),同時(shí)增強(qiáng)IFN-α的分泌,提示可通過采用CpG-ODN發(fā)揮機(jī)體固有免疫抗HBV感染。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R363
【圖文】：

組、高拷貝HBv一DNA血清+cpG組之間未見有顯著性差異(P二 0.186);轉(zhuǎn)染后空白對(duì)照組，高拷貝HBv一DNA血清+cpG組之間未見有顯著性差異(P=0.193)。(見圖3、表l)M700嘆700bp\400bPesse卜Zoobp~1。。bp尸40ObPwe卜200bPes月卜loobp尸(轉(zhuǎn)染前)(轉(zhuǎn)染后)圖3健康正常者轉(zhuǎn)染前后 PBMCsTLRgmRNA表達(dá)水平1:空白對(duì)照組;2:HBV-DNA高拷貝血清組;3:CpG加06組;4:HBv-DNA高拷貝血清+CPGZOO6組;M:Mark表一健康正常者轉(zhuǎn)染前后 PBMCsTLRgmRNA表達(dá)水平(X士s)HBV-DNA分組空白對(duì)照組高拷貝血清組CPG2006高拷貝血清+CpGZO06組轉(zhuǎn)染前轉(zhuǎn)染后 0.74士0.09 0.88士0.11“ 0.57士0.15 0.70士0.10a 0.73士0.100.86士0.14a 0.85士0.09 0.91士0.11“TLRgmRNA:與轉(zhuǎn)染前比較aP<0.05

(轉(zhuǎn)染前)(轉(zhuǎn)染后)圖4慢性HBV感染者轉(zhuǎn)染前后PBMCsTLRgmRNA表達(dá)水平表二慢性HBV感染者轉(zhuǎn)染前后PBMCsTLRgmRNA表達(dá)水平(X士s)HBV-DNA分組空白對(duì)照組CPG組轉(zhuǎn)染前轉(zhuǎn)染后0.68士0.12b0.83土0.02ac高拷貝血清組0.3]士0.070.54士0.O6ac0.59士0.llb0.95士0.03a高拷貝血清+CPG組0.53士0.16b0.75士0.10ac注:與轉(zhuǎn)染前比較，aP<0.05;與HBv一DNA高拷貝血清組比較，丫<0.05;與cpG組比較，cP<0.03.4WesternB1ot分析轉(zhuǎn)染前后PBMCsTLRg表達(dá)水平1、健康正常者轉(zhuǎn)染前后TLRg蛋白表達(dá)健康正常者轉(zhuǎn)染后空白對(duì)照組，高拷貝HBv~DNA血清組，cpG組，高拷貝HBV一DNA血清+CpG組TLRg

第3章結(jié)果1、健康正常者轉(zhuǎn)染前后IRF7mRNA表達(dá)與轉(zhuǎn)染前比較，健康正常者轉(zhuǎn)后各組IR王7mRNA表達(dá)上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=一2.439，p=0.025t一2.435，p一0.026;卜一2.715，p一0.014;卜一2.776，p=0.012)。轉(zhuǎn)染前健康正常者各比較無(wú)顯著性差異(P=0.155);轉(zhuǎn)染后高拷貝HBV一DNA血清組，CpG組，拷貝HBV一DNA血清+CpG組之間未見有顯著性差異(P=0.401)。2、慢性HBV攜帶者轉(zhuǎn)染前后IRF7mRNA表達(dá)與轉(zhuǎn)染前比較，慢性H攜帶者轉(zhuǎn)染后空白對(duì)照組，高拷貝HBV一DNA血清組IRF7mRNA表達(dá)水平均顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=一6.164，P二0.000;t=一6.121，p一0.000);轉(zhuǎn)染后C組，高拷貝HBv~DNA血清+CpG組較轉(zhuǎn)染前表達(dá)增強(qiáng)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意(t=一0.359，p一0.000;護(hù)一0.359，P一0.724);慢性HBV攜帶者轉(zhuǎn)染前后各組(各間F=16.668，F(xiàn)=7.093)，轉(zhuǎn)染前慢性HBV攜帶者CpG組、高拷貝HBv一D血清+CpG組之間未見有顯著性差異(P=0.593);轉(zhuǎn)染后高拷貝HBV-DNA血CPG組，高拷貝HBV一DNA血清+CpG組之間未見有顯著性差異(P=0.135)

【參考文獻(xiàn)】

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1 章歡;張倫理;;HBcAg對(duì)健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞刺激產(chǎn)生IFN-α影響的初探[J];江西醫(yī)藥;2010年05期

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2 白玉;TLR9在CHB患者PBMCs中的表達(dá)及CpG-ODN對(duì)TLR9調(diào)節(jié)作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2800943