發(fā)布時(shí)間：2020-08-14 15:57

【摘要】：目的:通過(guò)觀(guān)察血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa在造影劑腎病(Contrast-induced nephropathy,CIN)模型大鼠血漿中的表達(dá),明確CIN模型中是否存在血小板活化,同時(shí)探討GPIIb/IIIa與腎臟組織Kim-1及NF-κB之間的關(guān)系。同時(shí),使用依替巴肽干預(yù),了解抑制血小板活化對(duì)CIN發(fā)生發(fā)展的影響,初步探討血小板活化在造影劑腎病發(fā)病機(jī)制中的作用及其與炎癥反應(yīng)的相關(guān)性研究。方法:144只雄性Sprague Dawley大鼠,體重200~220g,隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組(C,n=36)、依替巴肽對(duì)照組(C+E,n=36)、CIN模型組(CM,n=36)和依替巴肽干預(yù)模型組(CM+E,n=36)。CIN模型組(CM)經(jīng)尾靜脈注入造影劑(76%復(fù)方泛影葡胺注射液,10ml/Kg),共計(jì)1次。正常對(duì)照組(C)經(jīng)尾靜脈注入生理鹽水(10ml/Kg)。依替巴肽對(duì)照組(C+E)經(jīng)尾靜脈先注入生理鹽水(10ml/Kg),再注入依替巴肽(7.5mg/Kg)。依替巴肽干預(yù)模型組(CM+E)經(jīng)尾靜脈注入造影劑(76%復(fù)方泛影葡胺,10ml/Kg),然后立即注入依替巴肽7.5mg/Kg。給藥前,每只大鼠眼球后采血1ml,給藥后,在6h、24h、48h、72h及10天時(shí)間點(diǎn),每組隨機(jī)處死6只大鼠,分別收集血液和腎臟標(biāo)本。血液標(biāo)本用于生化檢測(cè)(SCr、BUN、GPIIb/IIIa),腎臟組織標(biāo)本用于:1)HE染色,用于腎損傷病理評(píng)分;2)RT-PCR檢測(cè)腎臟組織NF-κB mRNA表達(dá)水平;3)ELISA檢測(cè)腎臟組織Kim-1的表達(dá)水平。所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(`x±s)表示,并采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。多組數(shù)據(jù)間比較,采用單因素方差分析(one-way ANOVA)或多因素方差分析(two-way ANOVA)。若有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,再用Student-Newmann Keuls(SNK)法進(jìn)行兩兩比較。p0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分析血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa的表達(dá)與腎臟損傷病理評(píng)分、腎組織Kim-1表達(dá)及NF-κB因子表達(dá)之間的相關(guān)性研究,采用Pearson相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果:正常對(duì)照組、依替巴肽對(duì)照組各檢測(cè)指標(biāo)在對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。1.血清SCr、BUN:在CIN模型組中,血清SCr水平在造模后6h開(kāi)始逐漸升高,峰值出現(xiàn)在48h,與正常對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),顯示造模成功;從第72h開(kāi)始SCr值逐漸下降,至第10天SCr值基本恢復(fù)正常,與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。給予依替巴肽干預(yù)后,CIN模型組大鼠血清SCr值升高幅度明顯下降,但仍高于正常對(duì)照組,在24/48/72h時(shí)間點(diǎn)有顯著差異(P0.05)。BUN變化趨勢(shì)與SCr相似。2.腎臟組織Kim-1:在CIN模型組中,Kim-1蛋白水平在造模后6h開(kāi)始迅速升高,24h即達(dá)到峰值,約為正常對(duì)照組數(shù)值的5倍,與正常對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);從第48h開(kāi)始Kim-1值逐漸下降,至第10天基本恢復(fù)正常,與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。給予依替巴肽干預(yù)后,CIN模型組大鼠Kim-1值升高幅度明顯下降,但仍高于正常對(duì)照組,在6/24/48/72h時(shí)間點(diǎn)與正常組有顯著差異(P0.05)。3.腎損傷病理評(píng)分:CIN模型組6h即出現(xiàn)腎小管損傷,可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。24h可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣脫落、細(xì)胞變性壞死及再生,部分腎小管結(jié)構(gòu)受損,髓質(zhì)區(qū)受損最嚴(yán)重,部分腎間質(zhì)還可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化形成,與正常對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);48h之后腎小管開(kāi)始逐漸出現(xiàn)修復(fù),至第10d基本恢復(fù)正常。CIN模型組的腎小管間質(zhì)損傷病理評(píng)分顯著高于同一時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組(P0.05)。給予依替巴肽干預(yù)后,CIN模型組大鼠腎臟損傷病理評(píng)分值升高幅度有所下降,與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但仍高于正常對(duì)照組,在6/24/48/72h時(shí)間點(diǎn)有顯著差異(P0.05)4.腎臟組織NF-κB m RNA:建模后腎臟組織各時(shí)間點(diǎn)NF-κB mRNA表達(dá)較對(duì)照組顯著升高(P0.05),在48h達(dá)到高峰,之后又逐漸下降恢復(fù)至正常水平。給予依替巴肽干預(yù)后,腎組織NF-κB m RNA表達(dá)水平輕度下降,與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但仍高于正常對(duì)照組,在6/24/48/72h時(shí)間點(diǎn)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.血小板活化標(biāo)記物GPIIb/IIIa:在CIN模型組中,血小板GPIIb/IIIa表達(dá)水平在造模后6h開(kāi)始迅速升高,24h即達(dá)到峰值,與正常對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);從第48h開(kāi)始血小板GPIIb/IIIa值逐漸下降,至第10天基本恢復(fù)正常、與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。給予依替巴肽干預(yù)后,CIN模型組大鼠血小板GPIIb/IIIa升高幅度受到明顯抑制,但仍高于正常對(duì)照組,在24/48/72h時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。6.相關(guān)性研究:血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIa與腎組織Kim-1、NF-κB mRNA表達(dá)均呈明顯正相關(guān),相關(guān)性系數(shù)r值分別為0.9267、0.8484,P值均0.05。結(jié)論:血小板活化參與了CIN的發(fā)病機(jī)制,抑制血小板活化可明顯減輕CIN模型大鼠的腎損傷程度,部分機(jī)制可能與干預(yù)NF-κB介導(dǎo)的炎癥通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R692;R-332
【圖文】：

圖 1 四組大鼠血清 SCr（μmol/L）隨時(shí)間的變化比較注 ①* ：與正常對(duì)照組相比，P＜0.05; ②# ：依替巴肽干預(yù)模型組與 CIN 模型組相比 < 0.05。③C 代表正常對(duì)照組；C+E 代表依替巴肽對(duì)照組；CM 代表 CIN 模型組；CM代表依替巴肽干預(yù)模型組；h 代表小時(shí)；d 代表天數(shù)；SCr 代表血肌酐。如表 2、圖 2 所示，四組大鼠血清 BUN 的變化趨勢(shì)與 SCr 相似。表 2 四組大鼠血清 BUN（mmol/L）隨時(shí)間的變化比較（ x±s , n=6）時(shí) 間 C C+E CM CM+E0h 5.44±1.62 4.97±1.61 5.31±2.11 4.75±1.666h 4.88±1.22 5.23±1.59 14.02±4.02*10.33±2.7524h 5.03±0.89 5.56±1.54 40.66±3.30*31.34±5.5648h 5.60±1.61 5.02±1.96 50.80±12.60*38.49±7.1272h 5.63±1.52 4.78±1.34 43.81±10.18*18.42±4.50

圖 2 四組大鼠血清 BUN（mmol/L）隨時(shí)間的變化比較備注：①* ：與正常對(duì)照組相比，P＜0.05; ②# ：依替巴肽干預(yù)模型組與 CIN 模型組相比，p < 0.05。③C 代表正常對(duì)照組；C+E 代表依替巴肽對(duì)照組；CM 代表 CIN 模型組；CM+E代表依替巴肽干預(yù)模型組；h 代表小時(shí)；d 代表天數(shù)；BUN 代表尿素氮。3.2 依替巴肽對(duì) CIN 模型大鼠腎組織 Kim-1 蛋白表達(dá)的影響如表 3、圖 3 所示，正常對(duì)照組及依替巴肽對(duì)照組腎組織 Kim-1 蛋白水平在各時(shí)間點(diǎn)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P 值均＞0.05。在 CIN 模型組中，Kim-1 蛋白水平在造模后 6h 開(kāi)始迅速升高，24h 即達(dá)到峰值，約為正常對(duì)照組數(shù)值的 5 倍，與正常對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；從第 48h 開(kāi)始 Kim-1 值逐漸下降，至第 10 天基本恢復(fù)正常、與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。給予依替巴肽干預(yù)后，CIN 模型組大鼠 Kim-1 值升高幅度明顯下降，但仍高于正常對(duì)照組，在 6/24/48/72h 時(shí)間點(diǎn)有顯著差異（P＜0.05）。

第 3 章 結(jié)果表 3 四組大鼠腎組織 Kim-1（pg/ml）蛋白表達(dá)隨時(shí)間的變化比較（ x±s , n=6）時(shí) 間 C C+E CM CM+E0h 27.45±6.11 30.22±6.23 29.96±4.86 31.67±4.446h 32.74±5.32 26.69±3.39 64.31±7.35*52.97±7.71*#24h 24.97±5.88 31.05±6.66 140.36±17.01*111.17±12.68*#48h 29.87±7.12 28.45±4.95 121.89±11.53*98.33±9.28*#72h 30.67±6.63 29.52±5.83 98.04±13.79*72.38±5.58*#10d 29.06±5.34 28.77±6.43 32.05±6.07 33.41±5.63備注：①* ： 與正常對(duì)照組相比，P＜0.05; ②# ：依替巴肽干預(yù)模型組與 CIN 模型組相比，p < 0.05。③C 代表正常對(duì)照組；C+E 代表依替巴肽對(duì)照組；CM 代表 CIN 模型組；CM+E 代表依替巴肽干預(yù)模型組；h 代表小時(shí)；d 代表天數(shù)；Kim-1 代表腎損傷因子-1。

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本文編號(hào)：2793239