發(fā)布時間：2017-03-31 02:19

  本文關(guān)鍵詞：血管新生中內(nèi)皮細(xì)胞表型的基因表達(dá)譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景: 血管分布廣泛，為機(jī)體提供氧氣和營養(yǎng)，運(yùn)走代謝廢物；病理情況下，也可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前研究最為廣泛的腫瘤血管形成途徑為血管新生（Angiogenesis）。在此過程中，內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cell, EC）形成三種表型：1.遷移表型，稱頂端細(xì)胞（tip cell）；2.增殖表型，稱柄細(xì)胞（stalk cell）；3.靜息表型，稱方陣細(xì)胞（phalanx cell）。這三種表型EC對于血管新生的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。 方法： 采用高密度接種和血清饑餓法制備人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical veinendothelial cell，HUVEC）系的靜息表型，低密度接種和血清培養(yǎng)法制備HUVEC系增殖表型，Boyden小室法制備HUVEC系遷移表型；應(yīng)用EdU法和流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVEC系的增殖能力，蘇木精染色法檢測HUVEC系的遷移能力，胰酶消化法收集遷移表型HUVEC系；利用基因芯片分析法在全基因組范圍內(nèi)篩選不同表型差異基因，并通過實(shí)時定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT PCR)驗證。 結(jié)果： 1.體外獲取HUVEC系靜息表型，應(yīng)用EdU法檢測陽性率約5%，流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVEC系細(xì)胞周期，處于G1期細(xì)胞多于90%，S期低于10%，與EdU法檢測結(jié)果基本一致。 2.體外獲取HUVEC系增殖表型，，應(yīng)用EdU法檢測陽性率近80%，流式細(xì)胞術(shù)檢測90%HUVEC系處于S期，與EdU法檢測結(jié)果相似。 3. Boyden小室提供趨化濃度梯度，制備HUVEC系遷移表型。蘇木精染色觀察到HUVEC系遷移進(jìn)入下室；對遷移細(xì)胞采用胰酶消化法收集，獲取HUVEC系遷移表型，隨著遷移時間的延長，收獲細(xì)胞數(shù)量逐漸增加；EdU法檢測陽性率約15%，流式細(xì)胞術(shù)檢測S期比例也約為15%。 4.基因芯片分析增殖表型中差異表達(dá)基因。根據(jù)基因的生物過程分類，與靜息表型EC相比，上調(diào)基因主要參與細(xì)胞周期，細(xì)胞核分裂和有絲分裂等生物過程；下調(diào)基因主要參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，RNA代謝和信號通路調(diào)節(jié)等生物過程；另外，差異基因主要參與DNA復(fù)制，細(xì)胞周期和嘧啶的代謝等信號通路。 5.基因芯片分析FBS誘導(dǎo)的遷移表型中差異表達(dá)基因。根據(jù)基因的生物過程分類，與靜息表型EC相比，上調(diào)基因主要參與細(xì)胞死亡，磷酸鹽代謝和血管新生等生物過程；下調(diào)基因主要參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，RNA代謝和GTP酶活性的調(diào)節(jié)等生物過程。 6.基因芯片分析VEGF誘導(dǎo)的遷移表型中差異表達(dá)基因。根據(jù)基因的生物過程分類，與靜息表型EC相比，上調(diào)基因主要參與固醇的生物合成和代謝，脂質(zhì)合成等生物過程；下調(diào)基因主要參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和胚胎發(fā)育的前后胚軸圖式形成等生物過程；另外，差異基因主要參與固醇和萜類化合物的生物合成等信號通路。 7.對HUVEC系三種表型中10個差異表達(dá)基因進(jìn)行qRT-PCR驗證，結(jié)果與芯片結(jié)果相近。 結(jié)論： 1.采用不同接種密度和培養(yǎng)條件的體外制備方式成功獲取HUVEC系的靜息、增殖、遷移表型。 2.基因芯片篩選出三種表型的差異基因，生物信息學(xué)分析證實(shí)體外獲取方法可行，并為進(jìn)一步探究不同表型中的調(diào)節(jié)機(jī)制提供了數(shù)據(jù)資源。 3.不同誘導(dǎo)因子獲取的遷移表型差異基因為研究單因素和多因素的遷移誘導(dǎo)方式提供了潛在的研究方向。
【關(guān)鍵詞】：血管新生 內(nèi)皮細(xì)胞 表型 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞表8-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-20
• 第2章 實(shí)驗研究20-51
• 第1節(jié) 實(shí)驗材料及實(shí)驗方法20-27
• 1.1 實(shí)驗材料和儀器20-21
• 1.1.1 樣本來源20
• 1.1.2 主要儀器及耗材20
• 1.1.3 主要試劑20-21
• 1.2 實(shí)驗方法21-27
• 1.2.1 HUVEC 系的培養(yǎng)21
• 1.2.2 靜息表型 HUVEC 系制備21-22
• 1.2.3 增殖表型 HUVEC 系制備22
• 1.2.4 遷移表型 HUVEC 系制備22
• 1.2.5 EdU 法檢測 HUVEC 系增殖22-24
• 1.2.6 PI 染色檢測細(xì)胞周期24
• 1.2.7 RNA 提取以及 qRT-PCR 分析24-26
• 1.2.8 基因芯片分析26-27
• 1.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析27
• 第2節(jié) 實(shí)驗結(jié)果27-51
• 2.1 HUVEC 系形態(tài)學(xué)觀察27
• 2.2 制備靜息、增殖和遷移表型 HUVEC 系27-30
• 2.2.1 不同表型 EC 增殖能力的檢測28
• 2.2.2 不同表型 EC 細(xì)胞周期的檢測28-29
• 2.2.3 細(xì)胞遷移能力的檢測29-30
• 2.3 基因芯片檢測不同表型 HUVEC 系中差異表達(dá)基因30-46
• 2.3.1 芯片樣本的制備30-31
• 2.3.2 差異表達(dá)基因的篩選31-32
• 2.3.3 差異表達(dá)基因的聚類分析32-33
• 2.3.4 差異表達(dá)基因的生物信息學(xué)分析33-45
• 2.3.5 qRT-PCR 驗證分析結(jié)果45-46
• 2.4 討論46-51
• 第3章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 作者簡介及攻讀碩士期間的研究成果57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ZHANG Ping;YAN XianChun;CHEN Yan;YANG ZiYan;HAN Hua;;Notch signaling in blood vessels: from morphogenesis to homeostasis[J];Science China(Life Sciences);2014年08期

  本文關(guān)鍵詞：血管新生中內(nèi)皮細(xì)胞表型的基因表達(dá)譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：278669