【摘要】：目的探討GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導(dǎo)兔BMSCs向類髓核細(xì)胞分化的可行性,為下一步GDF-5轉(zhuǎn)染兔BMSCs聯(lián)合支架材料注入活體兔椎間盤模型奠定實驗基礎(chǔ)。 方法采用全骨髓細(xì)胞貼壁分離法培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,倒置相差顯微鏡觀察BMSCs形態(tài),CD44、CD54免疫組化染色鑒定,PI染色測細(xì)胞周期,CCK-8檢測P3、P5、P7細(xì)胞增殖,檢測P3、P5、P7細(xì)胞貼壁率,RT-PCR檢測細(xì)胞二型膠原、蛋白多糖、MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因表達(dá)。分別用普通培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合兔椎間盤體外模型,培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。PI染色檢測細(xì)胞周期;CCK-8檢測細(xì)胞增殖;二型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍(lán)染色檢測二型膠原和蛋白多糖表達(dá)。 結(jié)果BMSCs形態(tài)呈梭形、紡錘形或多角形,境界清楚,表面抗原標(biāo)志物CD44、CD54免疫組化染色陽性,PI染色細(xì)胞周期顯示細(xì)胞主要處于G0/G1期,P3、P5、P7代細(xì)胞增殖及貼壁率有衰減趨勢。BMSCs不表達(dá)二型膠原和蛋白多糖基因,表達(dá)MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因。分別培養(yǎng)后,含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組,細(xì)胞形態(tài)變大變圓。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖,S期細(xì)胞數(shù)顯著增多,Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍(lán)染色:陰性。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組,細(xì)胞增殖初期顯著下降,S期細(xì)胞數(shù)增多,Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍(lán)染色:陽性。 結(jié)論GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導(dǎo)可以使兔BMSCs向類髓核細(xì)胞分化,誘導(dǎo)培養(yǎng)的兔BMSCs具有分泌Ⅱ型膠原和蛋白多糖的功能,為椎間盤再生提供了可能。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329
【圖文】：

圖 3 （x20）P3代BMSCs，細(xì)胞呈梭形、多 圖 4（x20）細(xì)胞核藍(lán)色深染，細(xì)胞漿呈角形、紡錘形，排列呈比較均一的漩渦狀 紅色，細(xì)胞呈梭形、多角形、紡錘形

圖 3 （x20）P3代BMSCs，細(xì)胞呈梭形、多 圖 4（x20）細(xì)胞核藍(lán)色深染，細(xì)胞漿呈角形、紡錘形，排列呈比較均一的漩渦狀 紅色，細(xì)胞呈梭形、多角形、紡錘形

（x40）原代，可見多量紅細(xì)胞，

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本文編號：2782715