【摘要】：目的探討GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導兔BMSCs向類髓核細胞分化的可行性,為下一步GDF-5轉染兔BMSCs聯(lián)合支架材料注入活體兔椎間盤模型奠定實驗基礎。 方法采用全骨髓細胞貼壁分離法培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞,倒置相差顯微鏡觀察BMSCs形態(tài),CD44、CD54免疫組化染色鑒定,PI染色測細胞周期,CCK-8檢測P3、P5、P7細胞增殖,檢測P3、P5、P7細胞貼壁率,RT-PCR檢測細胞二型膠原、蛋白多糖、MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因表達。分別用普通培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基、含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合兔椎間盤體外模型,培養(yǎng)骨髓間充質干細胞。PI染色檢測細胞周期;CCK-8檢測細胞增殖;二型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍染色檢測二型膠原和蛋白多糖表達。 結果BMSCs形態(tài)呈梭形、紡錘形或多角形,境界清楚,表面抗原標志物CD44、CD54免疫組化染色陽性,PI染色細胞周期顯示細胞主要處于G0/G1期,P3、P5、P7代細胞增殖及貼壁率有衰減趨勢。BMSCs不表達二型膠原和蛋白多糖基因,表達MMP1、MMP2、ADAMTs-5基因。分別培養(yǎng)后,含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組,細胞形態(tài)變大變圓。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基明顯促進細胞增殖,S期細胞數(shù)顯著增多,Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍染色:陰性。含100ng/mlGDF-5的培養(yǎng)基聯(lián)合椎間盤體外模型組,細胞增殖初期顯著下降,S期細胞數(shù)增多,Ⅱ型膠原免疫組化、阿利新蘭染色、甲苯胺藍染色:陽性。 結論GDF-5與兔椎間盤體外模型聯(lián)合誘導可以使兔BMSCs向類髓核細胞分化,誘導培養(yǎng)的兔BMSCs具有分泌Ⅱ型膠原和蛋白多糖的功能,為椎間盤再生提供了可能。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R329
【圖文】：

圖 3 （x20）P3代BMSCs，細胞呈梭形、多 圖 4（x20）細胞核藍色深染，細胞漿呈角形、紡錘形，排列呈比較均一的漩渦狀 紅色，細胞呈梭形、多角形、紡錘形

圖 3 （x20）P3代BMSCs，細胞呈梭形、多 圖 4（x20）細胞核藍色深染，細胞漿呈角形、紡錘形，排列呈比較均一的漩渦狀 紅色，細胞呈梭形、多角形、紡錘形

（x40）原代，可見多量紅細胞，

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本文編號：2782715