【摘要】：腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原體之一,可引起多種神經(jīng)并發(fā)癥。該疾病多發(fā)于5歲以下兒童,具有較高的死亡率,曾在全世界范圍內(nèi)多次大規(guī)模流行,嚴重威脅著人類的生命健康,因此EV71病毒的相關預防和治療顯得尤為重要。維甲酸誘導基因I(retinoic acid inducible-gene I,RIG-I)作為宿主細胞內(nèi)識別雙鏈RNA的一種受體,能夠幫助機體識別外來病毒RNA,啟動機體免疫信號,增強機體抗病毒能力。TRIM25(Tripartite motif-containing protein 25)作為泛素化RIG-I的重要E3泛素連接酶,能夠在RIG-I識別病毒RNA之后通過泛素化RIG-I的N端CARD區(qū)而將其激活,從而啟動下游信號通路,促進I型干擾素(interferon typeⅠ,IFN)的表達及相關炎癥因子的分泌,幫助宿主抵御外來侵害。有研究表明,EV71感染后可被RIG-I信號通路識別,并通過抑制RIG-I信號通路使得自身在宿主細胞內(nèi)得以復制和擴散。但目前關于EV71如何作用于RIG-I信號通路的詳細調(diào)節(jié)機制的研究較少,因此需要進一步的探究。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)EV71的3C蛋白可抑制RIG-I介導的IFN-β水平的提高,并且可以抑制RIG-I和TRIM25蛋白的表達。在mRNA水平上,EV71的3C蛋白可以抑制干擾素刺激基因(ISG15,ISG56)以及IFN-β水平的提高。此外,我們發(fā)現(xiàn)TRIM25的表達能夠促進RIG-I的穩(wěn)定,降低EV71的3C蛋白對它的降解,從而促進IFN-β水平的恢復,但TRIM25對于RIG-I泛素化起重要作用的活性位點的單個突變體TRIM25-L69A和TRIM25-V72A以及TRIM25四個主要結(jié)構域單獨截短的突變體TRIM25-RING,TRIM25-Bbox,TRIM25-CCD,TRIM25-SPRY未起到同樣的恢復效果。對EV71-3C的蛋白酶活性位點進行單點突變之后,發(fā)現(xiàn)3C蛋白對RIG-I和TRIM25蛋白的降解作用減弱。除此之外,我們還探究了能引起HFMD的其他主要病原體,如腸道病毒(EV-D68)和柯薩奇病毒(CVB3,CVA6,CVA16),發(fā)現(xiàn)除CVA16外,CVB3,EV-D68和CVA6腸道病毒的3C蛋白對RIG-I和TRIM25的蛋白表達同樣存在抑制作用。綜上,我們發(fā)現(xiàn)了腸道病毒屬的主要成員在感染宿主細胞時3C蛋白新的作用機制,這將為我們進一步研究該病毒的分子致病機制和疾病的治療奠定基礎。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R373.2
【圖文】：

圖 1.1 EV71病毒粒子及外殼蛋白結(jié)構[26]Figureure 1.1 Structural organization of the EV71[26]

圖 1.2 腸道病毒編碼蛋白結(jié)構示意圖：結(jié)構蛋白和非結(jié)構蛋白及其功能[25]Figure1.2 Scheme of the enterovirus genome:the polyprotein products and theirmajor functions[25]1.1.2 RLRs 信號通路

19圖 3.1 EV71和 CVB3 的 3C蛋白減少 RIG-I 表達并抑制 IFN-β 啟動子活化Figure3.1 The 3C proteins of EV71 and CVB3 reduce RIG-I expression andinhibit IFN-β promoter activation（A，D，G和 J）將由 IFN-β-Luc 熒光素酶報告質(zhì)粒，Renilla熒光素酶對照報告質(zhì)粒和相應的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進入 HEK293T細胞。48h后收取細胞，裂解后進行免疫印跡。抗體分別為 anti-Flag，anti-HA，anti-Tubulin。（B，E，H和 K）用Dual-Luciferase Reporter Assay System 分析細胞裂解物中 IFN-β 的表達水平。（C，F(xiàn)，I 和 L）取一部分 A，D，G和 J 設計的實驗的 HEK293T細胞，提取

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 滕崢;檀曉娟;邵俊杰;張勇;匡小舟;張曦;許文波;;2009年上海市手足口病流行病學和病原學特征[J];病毒學報;2010年06期

本文編號：2779598