【摘要】：腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原體之一,可引起多種神經(jīng)并發(fā)癥。該疾病多發(fā)于5歲以下兒童,具有較高的死亡率,曾在全世界范圍內(nèi)多次大規(guī)模流行,嚴(yán)重威脅著人類的生命健康,因此EV71病毒的相關(guān)預(yù)防和治療顯得尤為重要。維甲酸誘導(dǎo)基因I(retinoic acid inducible-gene I,RIG-I)作為宿主細(xì)胞內(nèi)識(shí)別雙鏈RNA的一種受體,能夠幫助機(jī)體識(shí)別外來病毒RNA,啟動(dòng)機(jī)體免疫信號(hào),增強(qiáng)機(jī)體抗病毒能力。TRIM25(Tripartite motif-containing protein 25)作為泛素化RIG-I的重要E3泛素連接酶,能夠在RIG-I識(shí)別病毒RNA之后通過泛素化RIG-I的N端CARD區(qū)而將其激活,從而啟動(dòng)下游信號(hào)通路,促進(jìn)I型干擾素(interferon typeⅠ,IFN)的表達(dá)及相關(guān)炎癥因子的分泌,幫助宿主抵御外來侵害。有研究表明,EV71感染后可被RIG-I信號(hào)通路識(shí)別,并通過抑制RIG-I信號(hào)通路使得自身在宿主細(xì)胞內(nèi)得以復(fù)制和擴(kuò)散。但目前關(guān)于EV71如何作用于RIG-I信號(hào)通路的詳細(xì)調(diào)節(jié)機(jī)制的研究較少,因此需要進(jìn)一步的探究。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)EV71的3C蛋白可抑制RIG-I介導(dǎo)的IFN-β水平的提高,并且可以抑制RIG-I和TRIM25蛋白的表達(dá)。在mRNA水平上,EV71的3C蛋白可以抑制干擾素刺激基因(ISG15,ISG56)以及IFN-β水平的提高。此外,我們發(fā)現(xiàn)TRIM25的表達(dá)能夠促進(jìn)RIG-I的穩(wěn)定,降低EV71的3C蛋白對(duì)它的降解,從而促進(jìn)IFN-β水平的恢復(fù),但TRIM25對(duì)于RIG-I泛素化起重要作用的活性位點(diǎn)的單個(gè)突變體TRIM25-L69A和TRIM25-V72A以及TRIM25四個(gè)主要結(jié)構(gòu)域單獨(dú)截短的突變體TRIM25-RING,TRIM25-Bbox,TRIM25-CCD,TRIM25-SPRY未起到同樣的恢復(fù)效果。對(duì)EV71-3C的蛋白酶活性位點(diǎn)進(jìn)行單點(diǎn)突變之后,發(fā)現(xiàn)3C蛋白對(duì)RIG-I和TRIM25蛋白的降解作用減弱。除此之外,我們還探究了能引起HFMD的其他主要病原體,如腸道病毒(EV-D68)和柯薩奇病毒(CVB3,CVA6,CVA16),發(fā)現(xiàn)除CVA16外,CVB3,EV-D68和CVA6腸道病毒的3C蛋白對(duì)RIG-I和TRIM25的蛋白表達(dá)同樣存在抑制作用。綜上,我們發(fā)現(xiàn)了腸道病毒屬的主要成員在感染宿主細(xì)胞時(shí)3C蛋白新的作用機(jī)制,這將為我們進(jìn)一步研究該病毒的分子致病機(jī)制和疾病的治療奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R373.2
【圖文】：

圖 1.1 EV71病毒粒子及外殼蛋白結(jié)構(gòu)[26]Figureure 1.1 Structural organization of the EV71[26]

圖 1.2 腸道病毒編碼蛋白結(jié)構(gòu)示意圖：結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白及其功能[25]Figure1.2 Scheme of the enterovirus genome:the polyprotein products and theirmajor functions[25]1.1.2 RLRs 信號(hào)通路

19圖 3.1 EV71和 CVB3 的 3C蛋白減少 RIG-I 表達(dá)并抑制 IFN-β 啟動(dòng)子活化Figure3.1 The 3C proteins of EV71 and CVB3 reduce RIG-I expression andinhibit IFN-β promoter activation（A，D，G和 J）將由 IFN-β-Luc 熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，Renilla熒光素酶對(duì)照?qǐng)?bào)告質(zhì)粒和相應(yīng)的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進(jìn)入 HEK293T細(xì)胞。48h后收取細(xì)胞，裂解后進(jìn)行免疫印跡�？贵w分別為 anti-Flag，anti-HA，anti-Tubulin。（B，E，H和 K）用Dual-Luciferase Reporter Assay System 分析細(xì)胞裂解物中 IFN-β 的表達(dá)水平。（C，F(xiàn)，I 和 L）取一部分 A，D，G和 J 設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)的 HEK293T細(xì)胞，提取

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 滕崢;檀曉娟;邵俊杰;張勇;匡小舟;張曦;許文波;;2009年上海市手足口病流行病學(xué)和病原學(xué)特征[J];病毒學(xué)報(bào);2010年06期

本文編號(hào)：2779598