【摘要】：目的:探討miR-155對骨髓來源間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)免疫耐受能力的影響及相關(guān)免疫學(xué)機制。方法:實驗分為Control組(不轉(zhuǎn)染對照組)、miR-155 agomir NC組(高表達組對照組)、miR-155 agomir組(高表達組)、miR-155 antagomir NC組(抑制表達組對照組)、miR-155 antagomir組(抑制表達組)。第一部分:通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染特異性調(diào)控miR-155表達水平,檢測轉(zhuǎn)染效率及轉(zhuǎn)染后miR-155表達水平。第二部分:轉(zhuǎn)染后的BMSCs在Transwell小室中誘導(dǎo)DCs 48小時,通過檢測DCs表型變化及組間DCs遷移能力差異,比較不同miR-155表達水平的BMSCs對DCs成熟和遷移能力的影響,Western Blot檢測誘導(dǎo)后DCs中AKT和NF-κB(P65)等信號通路蛋白表達情況,初步探索其影響機制。第三部分:在Transwell小室中,將誘導(dǎo)后的DCs與脾臟來源單個核細胞共培養(yǎng)72小時,流式細胞技術(shù)檢測刺激后各組T細胞增殖能力和各T細胞亞群的比例變化;實時定量PCR檢測IL-12a等細胞因子表達的組間差異,初步探索其影響機制。結(jié)果:第一部分:分離培養(yǎng)的BMSCs表面標(biāo)志CD90、CD105、CD73和CD44陽性表達、CD31、CD45陰性表達。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染BMSCs的轉(zhuǎn)染效率高,miR-155 agomir組的miR-155表達量升高了10000倍,miR-155 antagomir組表達量較其對照組明顯下降(P=0.0014,P0.05)。第二部分:誘導(dǎo)DCs 48小時后,miR-155 agomir組DCs表面標(biāo)志CD40和CD86表達量明顯下降(P0.05),遷移能力較其對照組也明顯下降(P=0.0054,P0.05),AKT和NF-κB(P65)信號通路蛋白表達量均明顯下降(P0.01);miR-155 antagomir組DCs遷移能力增加(P=0.0114,P0.05),AKT和NF-κB(P65)信號通路蛋白表達量無明顯變化(P0.05)。第三部分:刺激T細胞72小時后,miR-155 agomir組T細胞增殖能力較其對照組明顯降低,Th1細胞亞群比例明顯降低(P=0.0106,P0.05)、Treg細胞比例明顯升高(P=0.0005,P0.05),T細胞中IL-12a相關(guān)的RNA表達量明顯降低(P=0.0311,P0.05)。結(jié)論:MicroRNA-155可以提高BMSCs誘導(dǎo)免疫耐受的能力,即通過誘導(dǎo)DCs抑制T細胞增殖、抑制T細胞向Th1細胞分化從而誘導(dǎo)免疫耐受。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392
【圖文】：

3.1 BMSCs 形態(tài)學(xué)觀察和表面分子鑒定3.1.1 BMSCs 細胞形態(tài)觀察鏡下觀察獲得的原代細胞大小不一，以圓形居多。在 37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中靜置 72 小時后，鏡下可見到骨片周圍有多形性細胞爬出，數(shù)量不多，培養(yǎng)皿底部貼壁多為紡錘形細胞。培養(yǎng)約 1 周左右，皿底部可見細胞集落形成，且細胞增殖速度較前明顯增加。培養(yǎng)約 2 周左右，可見大部分集落之間出現(xiàn)融合，細胞數(shù)目較多且排列規(guī)則，細胞融合度可達到 85%-90%左右時，按照 1:2 比例傳代至 P1 代細胞。P1 代骨髓間充質(zhì)干細胞生長明顯變快，早期即可見到細胞貼壁且分布均勻，細胞形態(tài)較為規(guī)則，為長梭形。傳代后 7 天左右細胞之間融合度即可達到 90%左右，鏡下觀察細胞不再形成集落，而是均勻生長在皿底部。再次傳代至 P2 代時，去除皿中骨片。當(dāng)細胞培養(yǎng)至 P5 代時，觀察到細胞呈現(xiàn)典型的長梭形，也可多角形細胞，細胞形態(tài)大小分布等都比較均勻，如圖 1-1 所示。取 P5 代 BMSCs 進行后續(xù)實驗。

microRNA-155 對 BMSCs 誘導(dǎo)免疫耐受能力的調(diào)節(jié)和機制研究 第一部分CD105、CD73、CD44 的陽性表達率分別達到 90%、96%、95%和 99%，均為陽性表達，而 CD45 和 CD31 均為陰性表達。CD45 和 CD31 作為造血細胞的特異性表面標(biāo)志物，在骨髓間充質(zhì)干細胞中并不表達，而 CD90、CD105、CD73、CD44 則表達于骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細 胞 ， 可 見 本 實 驗 分 離 和 培 養(yǎng) 的 骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細 胞 是CD90+CD105+CD73+CD44+CD31-CD45-的細胞，純度較高。

BMSCs 誘導(dǎo)免疫耐受能力的調(diào)節(jié)和機制研究 倍（P＜0.0001），miR-155 antagomir 組 miR-155 表達水 組也明顯下降（P=0.0114，P＜0.05）（圖 1-5）。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ying-Chun Meng;Zhen-Ying Ding;Hai-Quan Wang;Li-Ping Ning;Chao Wang;;Effect of microRNA-155 on angiogenesis after cerebral infarction of rats through AT1R/VEGFR2 pathway[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年10期

本文編號：2776373