【摘要】：目的:探討miR-155對(duì)骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受能力的影響及相關(guān)免疫學(xué)機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)分為Control組(不轉(zhuǎn)染對(duì)照組)、miR-155 agomir NC組(高表達(dá)組對(duì)照組)、miR-155 agomir組(高表達(dá)組)、miR-155 antagomir NC組(抑制表達(dá)組對(duì)照組)、miR-155 antagomir組(抑制表達(dá)組)。第一部分:通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染特異性調(diào)控miR-155表達(dá)水平,檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及轉(zhuǎn)染后miR-155表達(dá)水平。第二部分:轉(zhuǎn)染后的BMSCs在Transwell小室中誘導(dǎo)DCs 48小時(shí),通過(guò)檢測(cè)DCs表型變化及組間DCs遷移能力差異,比較不同miR-155表達(dá)水平的BMSCs對(duì)DCs成熟和遷移能力的影響,Western Blot檢測(cè)誘導(dǎo)后DCs中AKT和NF-κB(P65)等信號(hào)通路蛋白表達(dá)情況,初步探索其影響機(jī)制。第三部分:在Transwell小室中,將誘導(dǎo)后的DCs與脾臟來(lái)源單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí),流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)刺激后各組T細(xì)胞增殖能力和各T細(xì)胞亞群的比例變化;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IL-12a等細(xì)胞因子表達(dá)的組間差異,初步探索其影響機(jī)制。結(jié)果:第一部分:分離培養(yǎng)的BMSCs表面標(biāo)志CD90、CD105、CD73和CD44陽(yáng)性表達(dá)、CD31、CD45陰性表達(dá)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染BMSCs的轉(zhuǎn)染效率高,miR-155 agomir組的miR-155表達(dá)量升高了10000倍,miR-155 antagomir組表達(dá)量較其對(duì)照組明顯下降(P=0.0014,P0.05)。第二部分:誘導(dǎo)DCs 48小時(shí)后,miR-155 agomir組DCs表面標(biāo)志CD40和CD86表達(dá)量明顯下降(P0.05),遷移能力較其對(duì)照組也明顯下降(P=0.0054,P0.05),AKT和NF-κB(P65)信號(hào)通路蛋白表達(dá)量均明顯下降(P0.01);miR-155 antagomir組DCs遷移能力增加(P=0.0114,P0.05),AKT和NF-κB(P65)信號(hào)通路蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化(P0.05)。第三部分:刺激T細(xì)胞72小時(shí)后,miR-155 agomir組T細(xì)胞增殖能力較其對(duì)照組明顯降低,Th1細(xì)胞亞群比例明顯降低(P=0.0106,P0.05)、Treg細(xì)胞比例明顯升高(P=0.0005,P0.05),T細(xì)胞中IL-12a相關(guān)的RNA表達(dá)量明顯降低(P=0.0311,P0.05)。結(jié)論:MicroRNA-155可以提高BMSCs誘導(dǎo)免疫耐受的能力,即通過(guò)誘導(dǎo)DCs抑制T細(xì)胞增殖、抑制T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化從而誘導(dǎo)免疫耐受。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

3.1 BMSCs 形態(tài)學(xué)觀察和表面分子鑒定3.1.1 BMSCs 細(xì)胞形態(tài)觀察鏡下觀察獲得的原代細(xì)胞大小不一，以圓形居多。在 37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中靜置 72 小時(shí)后，鏡下可見(jiàn)到骨片周圍有多形性細(xì)胞爬出，數(shù)量不多，培養(yǎng)皿底部貼壁多為紡錘形細(xì)胞。培養(yǎng)約 1 周左右，皿底部可見(jiàn)細(xì)胞集落形成，且細(xì)胞增殖速度較前明顯增加。培養(yǎng)約 2 周左右，可見(jiàn)大部分集落之間出現(xiàn)融合，細(xì)胞數(shù)目較多且排列規(guī)則，細(xì)胞融合度可達(dá)到 85%-90%左右時(shí)，按照 1:2 比例傳代至 P1 代細(xì)胞。P1 代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)明顯變快，早期即可見(jiàn)到細(xì)胞貼壁且分布均勻，細(xì)胞形態(tài)較為規(guī)則，為長(zhǎng)梭形。傳代后 7 天左右細(xì)胞之間融合度即可達(dá)到 90%左右，鏡下觀察細(xì)胞不再形成集落，而是均勻生長(zhǎng)在皿底部。再次傳代至 P2 代時(shí)，去除皿中骨片。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至 P5 代時(shí)，觀察到細(xì)胞呈現(xiàn)典型的長(zhǎng)梭形，也可多角形細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)大小分布等都比較均勻，如圖 1-1 所示。取 P5 代 BMSCs 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

microRNA-155 對(duì) BMSCs 誘導(dǎo)免疫耐受能力的調(diào)節(jié)和機(jī)制研究 第一部分CD105、CD73、CD44 的陽(yáng)性表達(dá)率分別達(dá)到 90%、96%、95%和 99%，均為陽(yáng)性表達(dá)，而 CD45 和 CD31 均為陰性表達(dá)。CD45 和 CD31 作為造血細(xì)胞的特異性表面標(biāo)志物，在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中并不表達(dá)，而 CD90、CD105、CD73、CD44 則表達(dá)于骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞 ， 可 見(jiàn) 本 實(shí) 驗(yàn) 分 離 和 培 養(yǎng) 的 骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞 是CD90+CD105+CD73+CD44+CD31-CD45-的細(xì)胞，純度較高。

BMSCs 誘導(dǎo)免疫耐受能力的調(diào)節(jié)和機(jī)制研究 倍（P＜0.0001），miR-155 antagomir 組 miR-155 表達(dá)水 組也明顯下降（P=0.0114，P＜0.05）（圖 1-5）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ying-Chun Meng;Zhen-Ying Ding;Hai-Quan Wang;Li-Ping Ning;Chao Wang;;Effect of microRNA-155 on angiogenesis after cerebral infarction of rats through AT1R/VEGFR2 pathway[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年10期

本文編號(hào)：2776373