【摘要】：[目的]觀察在銀屑病小鼠模型中衣原體蛋白Pgp3的干預(yù)對(duì)皮損以及IL-17、IL-22、IFN-γ表達(dá)水平的影響。[方法]通過(guò)大腸埃希菌表達(dá)融合蛋白GST-Pgp3,通過(guò)谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST)磁珠純化蛋白,用PreScission蛋白酶將GST標(biāo)簽后切除后得到蛋白Pgp3。把24只SPF飼養(yǎng)、體重18-20g、6-8周齡BALB/C雌性小鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型組,外涂對(duì)照組,外涂蛋白pgp3高濃度組(1000μg/ml),外涂蛋白pgp3低濃度組(50μg/ml),外涂CT795蛋白對(duì)照組。除了空白對(duì)照組外,其他5組小鼠用咪喹莫特(imiquimod,IMQ)誘導(dǎo)小鼠銀屑病樣皮損的模型,同時(shí),除了空白對(duì)照組和模型組外,其他4組小鼠均給予干預(yù):對(duì)照組外用PBS 200μl,外涂蛋白pgp3高濃度組外用濃度為1000μg/ml的蛋白200μl,外涂蛋白pgp3低濃度組外用濃度為50μg/ml的蛋白200μl,外涂CT795蛋白對(duì)照組外用濃度為1000μg/ml的蛋白200μl。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)期間每天觀察小鼠背部皮損區(qū)的變化,并根據(jù)銀屑病小鼠模型的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(TSS)每天觀察并記錄下小鼠皮損的變化,并給與評(píng)分。實(shí)驗(yàn)完成后,處死小鼠,取小鼠皮損區(qū)組織,一部分做病理切片,并在顯微鏡下觀察各組小鼠皮損區(qū)組織形態(tài)學(xué)的改變,一部分組織采用Real Time PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)檢測(cè)小鼠皮損中IL-17、IL-22、IFN-γRNA的表達(dá)水平并分析其變化。[結(jié)果]外用Pgp3蛋白干預(yù)的小鼠的皮損較模型組、對(duì)照組和外用CT795蛋白組明顯改善,TSS評(píng)分也低于模型組、外涂對(duì)照組和外涂CT795蛋白組,Real-Time PCR結(jié)果示外用Pgp3蛋白組干預(yù)組小鼠的皮損中IL-17、IL-22、IFN-γ的表達(dá)低于模型組和CT795蛋白組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)[結(jié)論]在銀屑病小鼠模型中,衣原體蛋白Pgp3干預(yù)后,可以抑制小鼠銀屑病樣皮損的發(fā)展,并且可以抑制IL-17、IL-22、IFN-γ的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R758.63;R-332
【圖文】：

圖 1：質(zhì)粒 pGEX-6P-1（1）、Pgp3（2）驗(yàn)證 的鑒定轉(zhuǎn)化 pGEX-6P-1/Pgp3 至 E.coli BL21 感受用 IPTG 進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，用 GST 磁珠純化后gp3，然后用 PP 酶切除標(biāo)簽，得到純化的蛋DS PAGE 電泳分別鑒定 GST-Pgp3、Pgp3小。見下圖 2：

圖 2：純化 GST-Pgp3 及 Pgp3 純化與濃縮結(jié)果：A：濃縮蛋白 Pgp3；B：融合蛋白 GST-Pgp3；C：純化蛋白 Pgp33.3 蛋白 Pgp3 的濃縮鑒定結(jié)果BCA 蛋白測(cè)定在超微量微孔板分光光度計(jì) OD562nm 處測(cè)得濃度為2838μg/ml。在超凈臺(tái)內(nèi)，用 PBS 將濃縮后的 Pgp3 蛋白稀釋成濃度為 1000μg/ml及 50μg/ml 兩種不同濃度后（注意無(wú)菌操作），然后分裝在 EP 管中，每個(gè) EP 管分裝 200μl，-80℃凍存?zhèn)溆�。見下圖 3：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 一、衣原體蛋白 Pgp3 對(duì)小鼠銀屑病皮損以及 IL-17、IL-22、IFN-γ 的影響第 2 天 第 4 天 第 6 天 第 8 天

【參考文獻(xiàn)】

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1 丁曉嵐;王婷琳;沈佚葳;王曉艷;周城;田珊;劉盈;彭光輝;周俊娥;薛樹旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴廣德;白云花;劉青;李航;張建中;;中國(guó)六省市銀屑病流行病學(xué)調(diào)查[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2010年07期

2 張廣中;王萍;李若瑜;王莒生;;銀屑病流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];實(shí)用皮膚病學(xué)雜志;2008年04期

本文編號(hào)：2771925