【摘要】：腺病毒(Adenovirus)是從手術(shù)切除的扁桃體組織中分離培養(yǎng)出的一種DNA病毒,常引起人上呼吸道、眼部上皮細(xì)胞和腸道感染。腺病毒易發(fā)生院內(nèi)感染和大規(guī)模流行,尤其在兒童和軍營(yíng)中易發(fā)生,艾滋病患者、‘固體器官和造血干細(xì)胞移植者、骨髓接受者、免疫遺傳缺陷患者等感染腺病毒的機(jī)率較大。腺病毒以其型別多、致病范圍廣而越來(lái)越受到關(guān)注,因此研發(fā)一種新的抗腺病毒藥物勢(shì)在必行。通過(guò)納米技術(shù)研制而成的納米銀(Silver nanoparticles, Silver-nps),可以抵抗G+和G-細(xì)菌的感染,也可以對(duì)人類(lèi)免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、猴痘病毒、單純皰疹病毒1型、流感病毒產(chǎn)生抑制作用。但有關(guān)Silver-nps抗腺病毒(ADV3)作用及機(jī)制的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本文采用細(xì)胞培養(yǎng)方法,免疫熒光方法,觀察Silver-nps對(duì)ADV3子代病毒體生成的抑制作用、對(duì)ADV3侵入細(xì)胞的阻斷作用以及直接滅活作用；同時(shí)應(yīng)用透射電鏡技術(shù),常規(guī)PCR和Real-Time PCR的方法,觀察Silver-nps在體外對(duì)ADV3病毒體及其DNA是否有破壞作用。Silver-nps在Hela細(xì)胞上最大無(wú)毒濃度(TC0)為52.48μg/mL; ADV3在Hela細(xì)胞上的半數(shù)感染濃度(TCID50)為10-2.74/100μL;最大無(wú)毒劑量范圍內(nèi),50μg/mL的Silver-nps和等體積100TCID50ADV3分別于殺病毒(先ADV3感染細(xì)胞后Silver-nps處理)、抗病毒(先Silver-nps處理細(xì)胞后ADV3感染)、直接滅活病毒(ADV3和Silver-nps體外作用2小時(shí)后感染細(xì)胞)三種不同給藥方式作用Hela細(xì)胞,細(xì)胞存活率分別為(93.58±1.79)%、(90.50±1.99)%、(95.38±2.98)%,而100TCID50ADV3感染Hela細(xì)胞后,測(cè)得細(xì)胞存活率為(31.92±2.86)%,兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；免疫熒光結(jié)果顯示,與ADV3對(duì)照組形成的強(qiáng)特異性熒光相比,先ADV3后Silver-nps、先Silver-nps后ADV3、Silver-nps和ADV3體外作用2小時(shí)后感染Hela細(xì)胞三種方式特異性熒光都很少見(jiàn)；電鏡結(jié)果顯示,與ADV3對(duì)照組相比,Silver-nps可直接與病毒粒子作用,且Silver-nps對(duì)ADV3粒子的破壞程度呈時(shí)間依賴(lài)性。PCR結(jié)果顯示,與病毒對(duì)照組和溶劑對(duì)照組相比,Silver-nps作用后所擴(kuò)增的目的條帶的灰度值都相對(duì)較低。Real-Time PCR亦表明,不同濃度Silver-nps作用后的ADV3DNA的拷貝數(shù)都有所降低,與溶劑對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。說(shuō)明Silver-nps對(duì)ADV3具有抑制作用,作用機(jī)制可能與Silver-nps破壞病毒粒子及其表面衣殼蛋白和腺病毒的DNA及其復(fù)制、轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的酶有關(guān)。上述結(jié)果表明,Silver-nps在細(xì)胞水平和分子水平上對(duì)腺病毒均有抑制作用,本研究為研制Silver-nps作為新的抗病毒藥物提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：大連大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：2768366