【摘要】：研究背景:調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Bregs)是一種B細(xì)胞亞群,近年來(lái)其免疫抑制功能越來(lái)越吸引眾學(xué)者的研究興趣。在包括炎癥、腫瘤、自身免疫性疾病等很多疾病的小鼠模型研究中,調(diào)節(jié)性B細(xì)胞通過(guò)不同機(jī)制發(fā)揮其免疫抑制作用。此外,在人類自身免疫性疾病觀察研究中發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的改變與一些自身免疫病的疾病進(jìn)展有關(guān)。研究證明調(diào)節(jié)性B細(xì)胞主要通過(guò)產(chǎn)生白細(xì)胞介素-10(IL-10)發(fā)揮抑制免疫應(yīng)答的作用。Gαq是GNAQ基因編碼的異源三聚體G蛋白(G protein)的α亞單位,它廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。近40%的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)依賴于Gq家族成員來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)胞外信號(hào)。研究證明Gαq在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,對(duì)很多免疫細(xì)胞具有調(diào)控作用。然而Gαq是否對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)有調(diào)控作用還沒(méi)有研究明確。研究目的:利用Gnnq基因敲除小鼠研究Gαq對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分化和功能的調(diào)控及其可能的分子機(jī)制。研究方法:1)通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾臟中脂多糖(LPS)刺激前后CD19+IL-10+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)兩組培養(yǎng)上清中 IL-10的含量。2)分選出Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾臟中的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞,分別與野生型小鼠脾臟Naive CD4+ T細(xì)胞共培養(yǎng),通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組CD4+ T細(xì)胞增殖,及其分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例。3)用參與調(diào)控IL-10表達(dá)的主要信號(hào)通路上的信號(hào)分子的特異性抑制劑預(yù)先處理Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾臟中的B細(xì)胞,隨后LPS誘導(dǎo)后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組CD19+IL-10+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例。蛋白質(zhì)免疫印記法驗(yàn)證兩組B細(xì)胞在LPS刺激后相關(guān)信號(hào)分子的磷酸化水平。4)收集類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血,分析這些患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中CD19+CD24hiCD38hi調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的比例和Gαq mRNA水平的相關(guān)性。研究結(jié)果:1)在Gnaq基因敲除小鼠中,經(jīng)LPS誘導(dǎo)后CD19+IL-10+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的分化被抑制。2)Gnaq基因敲除小鼠脾臟調(diào)節(jié)性B細(xì)胞抑制CD4+ T細(xì)胞增殖和促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的能力受損。3)PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信號(hào)通路分子可能參與了Gαq對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分化的調(diào)控。4)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD19+CD24hiCD38hi調(diào)節(jié)性B細(xì)胞比例及Gαq mRNA水平降低,并且兩者有顯著的相關(guān)性。研究結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Gαq對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的分化及免疫抑制功能有調(diào)控作用,PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信號(hào)通路可能參與了 Gαq對(duì)調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分化的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R392.12
【圖文】：

邐第一章材料與方法邐逡逑４）待膠徹底凝固后，小心拔出梳子，去掉兩側(cè)擋板，將凝膠放入電泳槽中，加逡逑入預(yù)冷電泳液使液面沒(méi)過(guò)凝膠。逡逑５）邐ＲＮＡ樣品與樣本緩沖液按比例混合，上樣入孔中。逡逑６）調(diào)節(jié)電壓至１２０Ｖ，開(kāi)始電泳３０ｍｉｎ。逡逑７）電泳完畢后將凝膠取出，放入ＣｈｅｍｉＤｏｃ？邋ＸＲＳ＋ｓｙｓｔｅｍ凝膠成像系統(tǒng)中觀逡逑察（圖１）。僅７５０ｂｐ處一條條帶者基因型為ＷＴ，僅４００ｂｐ處一條條帶者基因逡逑型為Ｇｎａｇ＇邋４００ｂｐ和７５０ｂｐ處共兩條條帶者基因型為以叫＋／—。逡逑ｒ＇－

邐第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果邐逡逑第二章實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑２．１邋Ｇａｑ調(diào)控Ｂｒｅｇ細(xì)胞的分化逡逑２．邋１．邋１邋Ｇ／ｍｆ小鼠與ＷＴ小鼠脾臟中的Ｂｒｅｇ細(xì)胞比例無(wú)差異逡逑�。叮钢荦g同性小鼠與ＷＴ小鼠，分離脾臟細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)分別逡逑檢測(cè)ＣＤ１９＋ＣＤｌｄｈｉＣＤ５＋、ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋兩種表型的Ｂｒｅｇ細(xì)胞比例，結(jié)果表明這逡逑兩種表型的Ｂｒｅｇ細(xì)胞比例在小鼠與ＷＴ小鼠中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ邋＞邋０．０５）逡逑（圖邋２）。逡逑Ｇａｔｅｄ：ＣＤ１９＋逡逑

逡逑ＷＴ小鼠（Ｐ邋＜邋０．０５）（圖３邋Ｃ）。說(shuō)明Ｇｔｘｑ參與調(diào)控ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ細(xì)胞的逡逑分化。逡逑Ａ邐ｌｓｏｔｙｐｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邐ＣＳ７ＢＬ／６邐Ｇｎａｑ＾邐Ｂ邋＾邐Ｃ逡逑“■彳媭％邐１１．９８％邐７．５９％邐｜邋ｌ邐？邐Ｉ邐：邐１逡逑Ｉ…——Ｊ邐｛邐ｆ邐邐邋ｆ邋ｉ？邋－ｒ－邐ｓ逡逑ｌａ邋ｒ邋＿邋ｎ逡逑＾邋＂ｒｍ邋ＦＩ邋－１Ｂ逡逑ｊ邐邐邐邋邐邐邐邐邐．邐．邐邐邋邐邐ｓ－邐邐邐邐逡逑０）１９邋邐邐邐—￣—＾邐＊邋ａｗｍ邋0ｍｆ邐ｃｓｗ逡逑圖３邋（？？＜／＿小鼠脾臟Ｂ細(xì)胞經(jīng)ＬＰＳ誘導(dǎo)的ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ細(xì)胞比例較ＷＴ小逡逑鼠低逡逑２．２邋Ｇａｑ調(diào)控Ｂｒｅｇ細(xì)胞的免疫抑制功能逡逑２．邋２．邋１邋Ｇ／ｉ叫＋小鼠脾臟Ｂｒｅｇ細(xì)胞抑制ＣＤ４＋邋Ｔ細(xì)胞增殖的能力受損逡逑分選純化小鼠和ＷＴ小鼠脾臟ＣＤ邋１９＋ＣＤ１邋ｄｈｌＣＤ５＋邋Ｂｒｅｇ細(xì)胞、ＷＴ小逡逑鼠Ｔｒｅｇ細(xì)胞（用作陽(yáng)性對(duì)照），分別與ＣＦＳＥ標(biāo)記的ＷＴ小鼠脾Ｎａ＿ｆｖｅＣＤ４＋Ｔ逡逑細(xì)胞共培養(yǎng)，７２ｈ后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞增殖狀況。結(jié)果顯示逡逑Ｂｒｅｇ組ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞增殖比例小于陰性對(duì)照組（Ｐ邋＜邋０．００１）。但ＧｍＶ—逡逑Ｂｒｅｇ組ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞增殖比例大于ＷＴ邋Ｂｒｅｇ組（Ｐ邋＜邋０．０５）（圖４）。表明逡逑Ｇ７＜Ｍ、鼠脾臟Ｂｒｅｇ細(xì)胞對(duì)ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞增殖有抑制作用

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Gopesh Srivastava;;The Pre-B Cell Receptor and Its Function during B Cell Development[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年02期

本文編號(hào)：2760908