【摘要】：目的:揭示ARHGEF-7蛋白在肝癌裸鼠中的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的作用,并進一步研究ARHGEF-7在其HCC中的發(fā)生、發(fā)展及可能的作用機制,為了解ARHGEF-7蛋白在HCC中的作用機制進行初步探索,以期為明確HCC發(fā)生、發(fā)展的機制提供理論研究基礎(chǔ)。方法:依據(jù)ARHGEF-7基因序列,構(gòu)建RNA干擾的慢病毒載體。用下調(diào)ARHGEF-7蛋白干擾的慢病毒感染HCCLM3細胞并設(shè)為實驗組;正常表達ARHGEF-7蛋白干擾的慢病毒感染HCCLM3細胞設(shè)為對照組。用慢病毒載體轉(zhuǎn)染的HCCLM3細胞建立裸鼠皮下移植瘤模型。取皮下瘤體活性較好的部分構(gòu)建裸鼠肝臟原位種植瘤模型。通過動物模型進行體內(nèi)研究,了解ARHGEF-7基因?qū)Ω渭毎┌l(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果:1)成功構(gòu)建了ARHGEF-7蛋白下調(diào)表達的慢病毒載體,建立了穩(wěn)定下調(diào)ARHGEF-7蛋白的HCCLM3細胞株,建立皮下瘤體動物模型。通過H-E染色檢測皮下原發(fā)瘤中的ARHGEF-7蛋白的表達情況來評價體內(nèi)感染效率和干擾效率,結(jié)果顯示在實驗組和對照組模型中均成陽性表達。2)構(gòu)建皮下種植瘤模型,運用免疫組化檢測皮下瘤體ARHGEF-7蛋白表達,發(fā)現(xiàn)實驗組瘤體中蛋白呈陰性表達而對照組中陽性表達。并進一步對瘤體大小、生長速度及重量分析,發(fā)現(xiàn)對照組皮下瘤體的體積大小、生長速度及重量明顯大于實驗組皮下瘤體。這提示下調(diào)ARHGEF-7蛋白的HCCLM3細胞株能有效的抑制肝細胞癌裸鼠皮下瘤體的生長。3.成功構(gòu)建裸鼠肝臟原位種植瘤模型。通過對裸鼠肺組織連續(xù)切片的方法計數(shù)肝臟原位瘤發(fā)生肺部轉(zhuǎn)移的數(shù)目。經(jīng)統(tǒng)計分析,發(fā)現(xiàn)差異具有顯著性意義(P0.01);我們進一步比較了實驗組和對照組裸鼠模型中肝臟原發(fā)瘤的體積大小,結(jié)果顯示肝臟原位種植35天后其原發(fā)瘤的大小差異明顯,具有顯著性意義(P0.05);運用免疫組化檢測肝內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤ARHGEF-7蛋白的表達水平,發(fā)現(xiàn)對照組瘤體組織中的蛋白表達明顯高于實驗組瘤體組織中的表達。這提示體內(nèi)抑制ARHGEF-7蛋白的表達能夠抑制肝細胞癌的生長及遠處轉(zhuǎn)移。結(jié)論:裸鼠皮下成瘤及肝臟原位成瘤體內(nèi)抑制ARHGEF-7蛋白的表達可以抑制肝癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移,進一步驗證了ARHGEF-7蛋白的致瘤性。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R-332

【參考文獻】

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本文編號：2754853