【摘要】：目的1研究microRNA-24(miR-24)對自噬的調(diào)控作用及相關(guān)分子機制。2基于自噬探討miR-24對雷帕霉素誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、遷移及管腔形成的影響。方法1實驗的分組、miR-24高表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染及自噬模型的建立根據(jù)實驗要求,將HUVECs隨機分為對照組、miR-24高表達+雷帕霉素組、雷帕霉素組。對照組的HUVECs不給予任何處理。miR-24高表達+雷帕霉素組的HUVECs則先轉(zhuǎn)染miR-24高表達質(zhì)粒,然后用1000 nmol/L雷帕霉素干預(yù)6 h建立自噬模型。雷帕霉素組的HUVECs用1000 nmol/L雷帕霉素干預(yù)6h建立自噬模型。2檢測各實驗組自噬相關(guān)基因Beclin-1、LC3II表達水平及自噬小體生成情況RT-PCR實驗檢測Beclin-1和LC3Ⅱ的mRNA水平;免疫印跡實驗(Western blotting)和免疫細胞化學(xué)實驗(Immunocytochemistry)檢測Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白水平。采用透射電鏡觀察細胞內(nèi)部自噬小體的生成情況。3檢測各實驗組HUVECs形態(tài)、增殖、遷移及管腔形成的情況通過HE染色法觀察各組HUVECs形態(tài)變化,CCK-8法檢測各組HUVECs的增殖能力;劃痕試驗檢測各組HUVECs遷移能力;進而用人工基底膜(Matrigel)試驗檢測各組HUVECs的成管能力。結(jié)果1與對照組比較,雷帕霉素組Beclin-1與LC3Ⅱ的mRNA和蛋白表達量均明顯增加(P0.05),且細胞質(zhì)中可見較多的自噬小體。而miR-24高表達+雷帕霉素組Beclin-1與LC3Ⅱ的mRNA和蛋白的表達量都只有較低程度的增加(P0.05),且細胞質(zhì)中也僅有較少量的自噬小體生成�？梢�,miR-24能顯著抑制Beclin-1與LC3Ⅱ的mRNA和蛋白的表達,并抑制自噬小體的形成。2與對照組比較,雷帕霉素組細胞形態(tài)發(fā)生了輕微的改變,呈不規(guī)則狀態(tài),并伴有少數(shù)細胞老化現(xiàn)象。細胞的活性、遷移數(shù)目及管腔樣結(jié)構(gòu)數(shù)量均稍有降低(P0.05)。而miR-24高表達+雷帕霉素組的細胞老化嚴(yán)重,其活性、遷移數(shù)目及管腔樣結(jié)構(gòu)數(shù)量均明顯降低(P0.05)。結(jié)論1 miR-24可在轉(zhuǎn)錄水平直接抑制自噬相關(guān)基因Beclin-1與LC3Ⅱ的表達,并抑制自噬小體的形成,進而下調(diào)自噬水平。2 miR-24能顯著抑制雷帕霉素誘導(dǎo)下的HUVECs增殖、遷移及管腔形成能力,其機制可能與細胞自噬存在交叉,下調(diào)細胞自噬水平可能是miR-24抑制細胞管腔形成的機制之一。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 周彬;黃巧冰;;血管內(nèi)皮細胞自噬在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年19期

本文編號：2754673