【摘要】：免疫層析試紙條檢測技術(shù)具有操作簡便、價格低廉、檢測快速、可現(xiàn)場即時檢測的優(yōu)勢,是目前傳統(tǒng)檢測法和儀器檢測法的良好補(bǔ)充。然而,傳統(tǒng)免疫層析試紙條檢測技術(shù)由于檢測靈敏度低,難以定量等缺點限制了其在醫(yī)學(xué)檢測中的發(fā)展。針對上述難題,本文將傳統(tǒng)膠體金試紙條進(jìn)行快速可視化定性的特性與熒光檢測高靈敏定量的優(yōu)勢相結(jié)合,構(gòu)建出同時具有顯色和熒光雙信號讀出機(jī)制的免疫層析試紙條檢測技術(shù),具體工作如下:利用超聲乳化法成功制備多包裹磁納米球,將其作為信號標(biāo)記物,構(gòu)建了基于磁致熒光淬滅的雙模態(tài)聯(lián)檢免疫層析試紙條,并全面評價了試紙條的質(zhì)量與性能。通過磁納米顆粒的高效熒光淬滅特性和超順磁性富集和分離待檢樣品,實現(xiàn)對血清及全血中生物標(biāo)志物的高靈敏雙模態(tài)聯(lián)合檢測。結(jié)果表明:多包裹磁球熒光淬滅能力強(qiáng),穩(wěn)定性好,在對乳腺癌相關(guān)標(biāo)志物CA153和CEA的聯(lián)合檢測中,靈敏度分別可達(dá)到0.06 ng/mL和0.09 U/mL,在對急性心肌梗死(AMI)相關(guān)標(biāo)志物cTnI和CK-MB的聯(lián)合檢測中,靈敏度分別可達(dá)到0.049 ng/mL和0.089ng/mL,且在實際樣本檢測中,檢測結(jié)果與臨床常規(guī)檢測方法一致性良好。綜上所述,本文成功構(gòu)建了基于磁致熒光淬滅的雙模態(tài)聯(lián)檢免疫層析檢測技術(shù),該聯(lián)檢技術(shù)提高了腫瘤和急性病癥的檢出率,降低了成本和樣本用量,縮短了檢測時間。以此試紙條為平臺,今后可推廣應(yīng)用到多種疾病標(biāo)志物的檢測。
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392-33
【圖文】：

圖 1-1 免疫層析試紙條基本結(jié)構(gòu)[36]Figure 1-1 The basic structure of ICTS[36]檢測過程中，先在樣品墊上滴加待測樣品，在毛細(xì)管作用力下動，待測樣品先與結(jié)合墊上的納米標(biāo)記探針反應(yīng)，然后被檢測體捕獲發(fā)生特異性夾心免疫反應(yīng)，生成包被抗體-抗原-納米標(biāo)，未與待測抗原結(jié)合的探針則被控制線上的二抗截留，以證明效性。簡單來講，當(dāng)閱讀窗內(nèi)出現(xiàn)兩條帶說明目標(biāo)物存在，一存在。該種免疫層析試紙條也稱為三明治型檢測試紙條，多適物質(zhì)類（如腫瘤標(biāo)志物）（圖 1-2（a）），其檢測信號與樣本正相關(guān)。另一種常見類型是適于檢測單表位小分子物質(zhì)類（如測試紙條（圖 1-2（b））。該種試紙條中的待測樣品與檢測線爭結(jié)合納米標(biāo)記探針，因此其檢測信號與樣本中待檢樣品濃度

圖 1-1 免疫層析試紙條基本結(jié)構(gòu)[36]Figure 1-1 The basic structure of ICTS[36]在檢測過程中，先在樣品墊上滴加待測樣品，在毛細(xì)管作用力下使待測樣流動，待測樣品先與結(jié)合墊上的納米標(biāo)記探針反應(yīng)，然后被檢測線上固定抗體捕獲發(fā)生特異性夾心免疫反應(yīng)，生成包被抗體-抗原-納米標(biāo)記探針三構(gòu)，未與待測抗原結(jié)合的探針則被控制線上的二抗截留，以證明納米標(biāo)記有效性。簡單來講，當(dāng)閱讀窗內(nèi)出現(xiàn)兩條帶說明目標(biāo)物存在，一條帶說明不存在。該種免疫層析試紙條也稱為三明治型檢測試紙條，多適用于多表子物質(zhì)類（如腫瘤標(biāo)志物）（圖 1-2（a）），其檢測信號與樣本中待檢樣呈正相關(guān)。另一種常見類型是適于檢測單表位小分子物質(zhì)類（如毒素）的檢測試紙條（圖 1-2（b））。該種試紙條中的待測樣品與檢測線上固定的競爭結(jié)合納米標(biāo)記探針，因此其檢測信號與樣本中待檢樣品濃度呈負(fù)相關(guān)

目前已被發(fā)展應(yīng)用于免疫學(xué)檢測及分離技術(shù)中，如圖1-3 所示。該法由于磁性納米顆粒在外加磁場的作用下可以進(jìn)行磁性分離和富集待測樣品，省去了長時間的離心分離純化步驟，具有操作簡單，重復(fù)性良好和高效的優(yōu)點，同時待測樣品幾乎沒有磁信號干擾，所以磁珠免疫層析檢測法能夠提高信噪比，從而提高檢測的穩(wěn)定性和靈敏度，此外，該法中不但可以根據(jù)檢測區(qū)域磁納米粒子聚集顏色深淺定性檢測，還可以結(jié)合配套的磁信號檢測儀器設(shè)備，使該種技術(shù)向高靈敏度和多元化檢測等方向發(fā)展。圖 1-3 磁珠免疫層析試紙條示意圖[54]Figure 1-3 Schematic of magnetic immune chromatography test strips[54]1.4 磁納米顆粒熒光淬滅原理分析熒光淬滅即利用膠體金（GNPs）、磁（MNPs）等金屬納米顆粒作為受體，熒光分子作為供體，在熒光淬滅模型中發(fā)生能量轉(zhuǎn)移導(dǎo)致熒光信號強(qiáng)度減弱的現(xiàn)象。GNPs 是目前最常用的淬滅劑，這主要歸功于其極高的淬滅效率（高達(dá) 99%）、高體表面積比以及特殊的 SPR 現(xiàn)象[55]。目前解釋 GNPs 對熒光淬滅的原理主要

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3 王瑋;馬]]

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