【摘要】：結核病(Tuberculosis,TB)是危害人類的細菌傳染病之一,其致病菌是結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB),MTB在由呼吸道進入肺部后,被肺泡細胞所吞噬,由宿主的第一道防線如巨噬細胞所識別,它可以通過抑制吞噬溶酶體的融合、干擾細胞信號轉導、抑制ROS(Reactive Oxygen Species)和RNS(Reactive Nitrogen Species)毒性反應、抑制細胞自噬等抵抗宿主細胞的免疫殺傷。目前,利用卡介苗(BCG)預防結核病已經(jīng)漸漸顯示出很多弊端,因此,本研究以RAW264.7細胞為研究對象,通過研究結核桿菌蛋白ESAT-6和CFP-10在感染巨噬細胞時引發(fā)相應的炎癥反應,以qRT-PCR方法初步研究相關炎癥因子及細胞焦亡相關因子的表達水平變化情況,Western blot檢測NLRP3炎性復合體各組分表達情況,流式細胞術檢測細胞凋亡率,測定凋亡相關酶活性,初步探索NLRP3炎性小體的活化機制,結果顯示:成功轉染pEGFP-ESAT-6、pEGFP-CFP-10載體,當載體與轉染試劑的比為1:4時,轉染后6h時更換為完全培養(yǎng)基,轉染的效率最佳;ESAT-6和CFP-10感染巨噬細胞后,其炎癥相關因子caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α、IFN-γ的表達量均發(fā)生不同程度上調(diào);NLRP3、ASC、IL-1β、caspase-1的表達量在蛋白水平上表達上調(diào),證明產(chǎn)生NLRP3炎性小體;流式細胞術檢測,ESAT-6和CFP-10感染巨噬細胞后,與對照組相比,凋亡率增高。同時,凋亡相關因子caspase-3、caspase-7、caspase-8和caspase-9表達量上調(diào);ESAT-6和CFP-10感染巨噬細胞后,焦亡相關因子GSDMD、caspase-11表達量上調(diào),細胞發(fā)生焦亡。因此,我們初步證實ESAT-6和CFP-10可以誘導巨噬細胞發(fā)生炎癥反應,產(chǎn)生NLRP3炎性小體,同時促進巨噬細胞發(fā)生凋亡和焦亡。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R392
【圖文】：

圖 1.1 GFP 組、ESAT-6 組和 CFP-10 組轉染 12h 的巨噬細胞 RAW264.7 倒置熒光顯微鏡觀察(20Fig.1.1 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 12inversion fluoresceence microscope (200×)PH：明場；GFP：綠色熒光；Merge：明場和綠色熒光疊加H: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and fluorescence overlay

圖 1.1 GFP 組、ESAT-6 組和 CFP-10 組轉染 12h 的巨噬細胞 RAW264.7 倒置熒光顯微鏡觀察(200×)Fig.1.1 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 12h byinversion fluoresceence microscope (200×)PH：明場；GFP：綠色熒光；Merge：明場和綠色熒光疊加PH: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and Greefluorescence overlay

圖 1.3 GFP 組、ESAT-6 組和 CFP-10 組轉染 36h 的巨噬細胞 RAW264.7 倒置熒光顯微鏡觀察(200Fig.1.3 Examination of RAW264.7 cell transfected with GFP,ESAT-6 and CFP-10,for 36hinversion fluoresceence microscope (200×)PH：明場；GFP：綠色熒光；Merge：明場和綠色熒光疊加H: Bright field; GFP: Green fluorescence; Merge: Bright field and Brightfield and Gfluorescence overlay

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張躍輝;賀福初;田春艷;王建;;炎癥小體的研究進展概述[J];生命的化學;2015年05期

2 武月章;趙默涵;張文慧;張林波;;系統(tǒng)疫苗學在疫苗效能評價中的應用[J];國際免疫學雜志;2015年05期

3 張敏;劉微;李擎;郭春燕;何俊霞;斯日古楞;吉日木圖;;基因轉染技術及其在腫瘤研究中應用的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年05期

4 雷國偉;毛立明;李華;安利國;楊桂文;孟廣勛;;炎癥小體在對抗微生物感染中的作用[J];中國細胞生物學學報;2011年12期

本文編號：2745060