發(fā)布時間：2020-07-02 23:47

【摘要】：目的:1.利用人類巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87,檢測細(xì)胞遷移侵襲抑制蛋白(MIIP)表達(dá)量的變化,從而探討HCMV感染對U87細(xì)胞的影響。2.通過檢測遷移侵襲抑制蛋白(MIIP)基因及其蛋白表達(dá)水平的增減,結(jié)合細(xì)胞增殖、侵襲及遷移水平的波動,探討HCMV和神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展之間的相關(guān)性及科學(xué)意義。方法與材料:1.HCMV AD169(MOI為5)感染神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87,利用相差顯微鏡觀察U87細(xì)胞在未感染和感染后6h、12h、24h、48h的形態(tài)學(xué)特征變化。2.用過表達(dá)的MIIP基因慢病毒感染HCMV陽性的U87細(xì)胞作為實驗組,同時將僅感染HCMV的U87細(xì)胞作為對照組,由空載體CMV4轉(zhuǎn)染的HCMV感染的U87細(xì)胞作為空質(zhì)粒組。分別收集細(xì)胞用Western-blot檢測MIIP編碼蛋白的表達(dá)量的變化。3.用CCK-8法檢測神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87的增殖活性的情況。4.用Transwell體外遷移實驗檢測實驗組、空質(zhì)粒組和對照組的細(xì)胞遷移能力。5.用Transwell體外侵襲實驗和劃痕實驗檢測實驗組、空質(zhì)粒組和對照組的細(xì)胞侵襲力。結(jié)果:1.HCMV感染U87細(xì)胞后,細(xì)胞形態(tài)有明顯的變化。2.Western-blot檢測表明實驗組(U87+HCMV/MIIP組)細(xì)胞的MIIP蛋白表達(dá)量較空質(zhì)粒組(U87+HCMV/CMV4組)和對照組(U87+HCMV組)相比明顯上調(diào)(P0.01)。3.CCK-8檢測表明對照組細(xì)胞的增殖能力明顯強(qiáng)于實驗組(P0.01)。4.Transwell體外遷移檢測表明,與空質(zhì)粒組、對照組相比,實驗組細(xì)胞發(fā)生遷移的總數(shù)明顯減少,實驗組細(xì)胞的遷移能力明顯弱于空質(zhì)粒組和對照組(P0.01)。5.Transwell體外侵襲實驗檢測表明較空質(zhì)粒組和對照組,實驗組發(fā)生侵襲的細(xì)胞顯著少于空質(zhì)粒組和對照組,實驗組細(xì)胞的侵襲力明顯減弱,且細(xì)胞數(shù)顯著下調(diào)(P0.01);劃痕實驗顯示實驗組遷移能力顯著降低(P0.01)。結(jié)論:人巨細(xì)胞病毒(HCMV)人群中的感染率極高,病毒能夠出現(xiàn)激活狀態(tài)和潛伏狀態(tài)交替出現(xiàn)的情況,潛伏感染的病毒因基因轉(zhuǎn)錄被抑制不能產(chǎn)生并釋放新的病毒顆粒,而病毒激活狀態(tài)下可產(chǎn)生釋放新的病毒顆粒,HCMV的激活受到各種轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子等多種因素的作用HCMV感染與多種腫瘤潛在關(guān)系,MIIP基因是新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因,其表達(dá)缺失時易出現(xiàn)細(xì)胞有絲分裂失控,腫瘤細(xì)胞易形成并易發(fā)生遷移及侵襲。本實驗過表達(dá)MIIP基因后觀察HCMV感染的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞遷徙能力、增殖能力、侵襲能力等特性的改變,得出初步結(jié)論如下:1、HCMV感染的U87細(xì)胞的增殖活性受到過表達(dá)MIIP基因的抑制;2、HCMV感染的U87細(xì)胞的遷移能力在MIIP基因過表達(dá)后減弱;3、MIIP基因過表達(dá)后HCMV感染的U87細(xì)胞的侵襲能力受到抑制。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R373
【圖文】：

0%血清培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87（×100倍）

在培養(yǎng)的過程中，這種細(xì)胞能夠貼壁生長，形狀具有扁平梭形的特性，其大小比較均勻，如圖 3.2.1 所示。圖3.2.1 經(jīng)過10%FBS培養(yǎng)的實驗細(xì)胞(HELF)（×100倍）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 王一維;辛彥;;MIIP通過HDAC6參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年06期

2 汪洋;盛曉芳;高晶;陳淑;董偉;戴嘉中;潘力;;高分級神經(jīng)膠質(zhì)瘤112例術(shù)后放、化療療效及其預(yù)后分析[J];腫瘤;2009年07期

3 尚世強(qiáng);陶然;;人巨細(xì)胞病毒研究新進(jìn)展[J];實用兒科臨床雜志;2007年22期

本文編號：2738848