【摘要】：目的化療藥物引起的胃腸炎是臨床上化療藥物引起的最常見的副作用之一,不僅嚴(yán)重影響化療藥物的治療效果,而且使接受化療的腫瘤患者生活質(zhì)量進(jìn)一步下降,死亡率明顯增加。目前臨床上主要以對(duì)癥支持治療為主,缺乏針對(duì)性的治療手段。有報(bào)道發(fā)現(xiàn),炎癥與免疫的激活在化療藥物的抗腫瘤作用的過程中起到至關(guān)重要的作用,這個(gè)過程有賴于免疫細(xì)胞對(duì)死亡相關(guān)分子模式(danger-associated molecule patterns,DAMPs)的識(shí)別。而羥氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)因其良好的有效性及安全性被廣泛應(yīng)用于風(fēng)濕免疫性疾病的治療,其對(duì)免疫系統(tǒng)的影響主要是抑制免疫細(xì)胞對(duì)DAMPs的識(shí)別,以及對(duì)多個(gè)炎癥信號(hào)通路傳導(dǎo)及促炎因子的產(chǎn)生的抑制作用。因此,本實(shí)驗(yàn)以此作為切入點(diǎn),探究了 HCQ在氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎模型中的作用及其背后的分子機(jī)制,為化療藥物引起的胃腸炎提供一個(gè)治療新思路,為臨床提供實(shí)現(xiàn)化療藥物抗腫瘤治療優(yōu)化的選擇。方法實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分,前兩部分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn),第三部分為體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,首先觀察了 HCQ對(duì)氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎的治療作用,主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究:通過建立氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎模型,觀察HCQ治療前后氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎小鼠臨床癥狀嚴(yán)重程度的變化,包括體重的變化和腹瀉評(píng)分;采用HE染色對(duì)HCQ治療前后小鼠小腸進(jìn)行組織病理學(xué)觀察;另外還運(yùn)用了TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling)染色的方法比較了 HCQ治療前后對(duì)小鼠小腸上皮細(xì)胞死亡的影響;用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的方法檢測了 HCQ治療對(duì)模型小鼠血清中細(xì)胞因子IL-1β(interleukin-1β)水平的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察了 HCQ調(diào)節(jié)化療藥物引起的胃腸炎的分子機(jī)制。采用免疫熒光染色的方法觀察HCQ治療前后小鼠小腸切片中信號(hào)通路的變化情況。體外實(shí)驗(yàn),首先以人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-116為研究對(duì)象,探索了氟尿嘧啶濃度及刺激時(shí)間對(duì)細(xì)胞上清dsDNA(double-strand DNA)水平之間的關(guān)系。之后以小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞(bone-marrow derived macrophages/dendritic cells,BMDMs/BMDCs)作為研究對(duì)象,觀察了 HCQ干預(yù)對(duì)dsDNA刺激下BMDMs/BMDCs分子信號(hào)通路及炎性因子水平IL-1β的影響。本研究使用IBM SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示。本實(shí)驗(yàn)中兩個(gè)樣本的均數(shù)比較采用非配對(duì)的t檢驗(yàn),雙側(cè)取值;兩組以上均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),其中組與組之間差異的比較采用LSD檢驗(yàn),以P0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,氟尿嘧啶誘導(dǎo)的胃腸炎模型小鼠血清中dsDNA水平明顯升高,HCQ能明顯降低模型小鼠胃腸炎的嚴(yán)重程度。與模型組比較,組織病理切片上觀察HCQ治療能明顯恢復(fù)化療藥物對(duì)小鼠小腸細(xì)胞及組織結(jié)構(gòu)的破壞;TUNEL染色顯示HCQ治療明顯減少模型小鼠小腸上皮細(xì)胞的死亡;ELISA結(jié)果顯示HCQ治療能明顯降低模型小鼠血清中炎癥因子IL-1β水平。小鼠小腸組織切片免疫熒光結(jié)果顯示HCQ減輕化療藥物的胃腸炎是通過抑制TLR9-NF-κB信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,氟尿嘧啶與HCT-116細(xì)胞上清dsDNA 水平之間的關(guān)系存在劑量與時(shí)間關(guān)系,dsDNA濃度均隨著氟尿嘧啶濃度的增加及刺激時(shí)間的延長逐漸升高。免疫蛋白印跡法檢測HCQ預(yù)處理抑制BMDMs/BMDCs中TLR9的表達(dá)。ELISA結(jié)果顯示HCQ預(yù)處理可降低dsDNA刺激的BMDMs/BMDCs培養(yǎng)上清中IL-1β水平。結(jié)論雙鏈DNA是化療藥物誘導(dǎo)的胃腸炎發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵因素,是炎癥與免疫系統(tǒng)活化的始動(dòng)因素。HCQ可通過抑制機(jī)體炎癥細(xì)胞TLR9對(duì)dsDNA的識(shí)別,進(jìn)一步抑制其下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,從而抑制炎癥而發(fā)揮作用,減輕了疾病的嚴(yán)重程度。在臨床中HCQ治療化療藥物引起的胃腸道毒性,以及從炎癥的識(shí)別與發(fā)生的角度作為切入點(diǎn)在化療藥物引起的胃腸道毒性尚無報(bào)道。本研究通過研究HCQ在化療藥物誘導(dǎo)的胃腸炎中的治療作用,為臨床提供了一個(gè)新的治療選擇,并幫助實(shí)現(xiàn)化療藥物抗腫瘤治療的優(yōu)化。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R57;R-332
【圖文】：

脫氧尿苷一磷酸（ｄＵＭＰ）形成胸腺嘧啶單磷酸（ｄＴＭＰ），而氟尿嘧啶在細(xì)胞內(nèi)逡逑轉(zhuǎn)化為有效的氟尿嘧啶脫氧核苷酸可導(dǎo)致這個(gè)過程中ｄＴＭＰ的稀缺［６］，因此使逡逑迅速分裂的癌細(xì)胞因ＤＮＡ合成受干擾而導(dǎo)致死亡（圖１）邋［７］。與亞葉酸鈣連用逡逑時(shí)，由于亞葉酸鈣提供了減少的葉酸鹽的外源來源，穩(wěn)定了邋５－ＦＵ－ＴＳ復(fù)合物，因逡逑此X椙苛隋澹擔(dān)疲盞南赴拘裕郟福蕁ｅ義希卞義

本文編號(hào)：2735178