【摘要】：1.富血小板血漿(PRP)對(duì)新生乳鼠皮膚結(jié)構(gòu)、屏障角質(zhì)套膜發(fā)育的研究(1)背景皮膚是人體最大的器官,由表皮和真皮構(gòu)成,皮膚是抵御外部環(huán)境損傷的第一道屏障。皮膚屏障功能中角質(zhì)層(SC)是防止外源性刺激及抗原進(jìn)入機(jī)體及體內(nèi)水電解質(zhì)丟失的主要屏障。然而角質(zhì)層內(nèi)形成的角質(zhì)套膜(cornified envelope,CE),作為皮膚屏障的基礎(chǔ)。嬰幼兒皮膚約在三歲左右才完全達(dá)到成年人結(jié)構(gòu),同時(shí)較低的皮膚屏障功能,當(dāng)收到外源性刺激時(shí),更容易啟發(fā)皮膚內(nèi)源性免疫反應(yīng),及皮膚損傷,誘發(fā)一系列皮膚屏障功能障礙相關(guān)疾病的發(fā)生。臨床上研究報(bào)道眾多皮膚疾病發(fā)病機(jī)制與皮膚屏障功能下降、障礙相關(guān)。因此皮膚屏障相關(guān)研究越來越受到重視,增強(qiáng)皮膚屏障功能的治療手段同時(shí)成為預(yù)防及治愈多種皮膚疾病發(fā)生的重點(diǎn)。PRP因其含有豐富的生長(zhǎng)因子等,不僅可以增加肌膚含水量,同時(shí)能夠加強(qiáng)皮膚對(duì)外界的免疫防護(hù)能力,減少外界物質(zhì)對(duì)皮膚的刺激,使皮膚的狀態(tài)恢復(fù)最佳。因此本研究采用初生C57BL/6乳鼠動(dòng)物模型觀察富血小板血漿(PRP)干預(yù)皮膚結(jié)構(gòu)及皮膚屏障角質(zhì)套膜的發(fā)育過程。(2)目標(biāo)探討富血小板血漿(PRP)在新生乳鼠毛囊發(fā)育過程中的影響。(3)方法與結(jié)果取新生C57BL/6乳鼠40只,隨機(jī)分為富血小板血漿(PRP)實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組,每組20只。在背部正中部位區(qū)域,實(shí)驗(yàn)組0.05ml血小板濃度為10~9/ml富血小板血漿單點(diǎn)皮內(nèi)注射,對(duì)照組等量注射生理鹽水。分別于第3d、5d、7d、10d時(shí)每組各取5只動(dòng)物樣本,進(jìn)行全層皮膚組織石蠟包埋常規(guī)HE、Masson染色,免疫組化技術(shù)檢測(cè)目的蛋白,對(duì)組織切片進(jìn)行組織學(xué)觀察拍攝,使用ImageJ軟件測(cè)量皮膚灰度值及目的蛋白表達(dá)IOD值,ipp軟件對(duì)真皮及表皮的厚度進(jìn)行測(cè)量,spss統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行分析計(jì)算。(4)結(jié)果PRP顯著促進(jìn)初生乳鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)表皮、真皮發(fā)育過程。同時(shí)PRP干預(yù)治療明顯促進(jìn)早期角質(zhì)形成細(xì)胞的增值與分化,并且PRP干預(yù)治療使初生乳鼠皮膚組織早期兜甲蛋白(Ioricrin)、內(nèi)披蛋白(Involucrin)表達(dá)量明顯上調(diào)。(5)結(jié)論P(yáng)RP對(duì)乳鼠早期表皮、真皮結(jié)構(gòu)發(fā)育,及皮膚屏障功能趨向成熟完整的過程具有明顯的促進(jìn)作用。2.富血小板血漿(PRP)對(duì)新生乳鼠毛囊發(fā)育的研究(1)背景覆于體表的皮膚作為人體最大的器官,直接與所處的外界環(huán)境接觸,是人體的天然外衣,對(duì)維持人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定極為重要。具有屏障、吸收、感覺、分泌和排泄、體溫調(diào)節(jié)、物質(zhì)代謝、免疫等多種功能。毛囊是皮膚重要的附屬器之一,其峽部的表皮干細(xì)胞是可以在生理狀態(tài)下和創(chuàng)傷修復(fù)時(shí)為皮膚表皮組分提供細(xì)胞來源。脫發(fā)或突發(fā)是一種常見且難以治愈的疾病,可以在生命早期出現(xiàn),而其治療方案的選擇有限。并且皮膚組織的創(chuàng)傷治療或是再生修復(fù)發(fā)面,人們期望達(dá)到較完美修復(fù),其中皮膚組織及其毛囊附屬器官的發(fā)育過程研究越來越受到重視。富血小板血漿(platelet-rich plasma,PRP)分泌多種生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子和其它活性產(chǎn)物。臨床研究表明,PRP可以用作皮膚創(chuàng)傷修復(fù),減輕疼痛和減少瘢痕的增生。同時(shí),PRP在皮膚屏障,色素代謝和附屬器官汗腺、毛囊方面的研究越來越引起關(guān)注。本研究采用初生C57BL/6乳鼠動(dòng)物模型進(jìn)行富血小板血漿(PRP)干預(yù)其毛囊發(fā)育過程。(2)目標(biāo)探討富血小板血漿(PRP)在新生乳鼠毛囊發(fā)育過程中的影響。(3)方法與結(jié)果取新生C57BL/6乳鼠40只,隨機(jī)分為富血小板血漿(PRP)實(shí)驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組,每組20只。在背部正中部位區(qū)域,實(shí)驗(yàn)組0.05ml血小板濃度為109/ml富血小板血漿單點(diǎn)皮內(nèi)注射,對(duì)照組等量注射生理鹽水。分別于第3d、5d、7d、10d時(shí)每組各取5只動(dòng)物進(jìn)行大體觀察,并切取全層皮膚組織石蠟包埋常規(guī)HE、染色,對(duì)組織切片進(jìn)行組織學(xué)觀察拍攝,使用Image J軟件測(cè)量皮膚灰度值,spss統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行分析計(jì)算。(4)結(jié)果在第3、5、7 d時(shí)大體觀察富血小板血漿組小鼠皮膚發(fā)育顏色的改變現(xiàn)象較對(duì)照組更早發(fā)生,其皮膚顏色灰度值檢測(cè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與大體觀察相符(P≤0.01),同時(shí),第10 d時(shí),大體觀察發(fā)現(xiàn)富血小板血漿(PRP)組小鼠毛發(fā)的密度也明顯高于對(duì)照組。HE染色結(jié)果顯示PRP組的小鼠皮膚組織毛囊數(shù)量及在同天數(shù)毛囊的發(fā)育狀態(tài)明顯優(yōu)于對(duì)照組。(5)結(jié)論富血小板血漿(PRP)有效促進(jìn)毛囊的發(fā)育與成熟過程。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R62;R-332
【圖文】：

第一章 富血小板血漿（PRP）對(duì)新生乳鼠皮膚結(jié)構(gòu)、屏障角質(zhì)套膜發(fā)育的研究HE、Masson 染色：石蠟切片（5μm）厚切片，以 HE、Masson 染色試劑色，脫水封片。免疫組化染色：切片脫蠟、復(fù)水、抗原修復(fù)、滅活內(nèi)源性過氧化物酶、血孵育一抗 4 度過夜、復(fù)溫、孵育二抗、SABC、DAB 顯色、復(fù)染、脫水、表皮、真皮厚度檢測(cè)： 使用 ImageJ 軟件系統(tǒng)檢測(cè) 50 倍放大倍數(shù)皮膚切本，計(jì)算厚度的平均值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析： 數(shù)據(jù)分析采用 SPSS 18.0 軟件，圖像數(shù)據(jù)采用 ImageJ 軟件。數(shù)值數(shù)據(jù)采用 x_±s 表示。

圖 2 C57BL/6 乳鼠出生后皮膚組織 Masson染色結(jié)果，比例尺為：2000μm。表 1 胎鼠和幼鼠表皮厚度變化(單位 um)Tab．1 The variation of thickness of epidermis in infant mice(unit：um)表皮厚度（μm）天數(shù)（day） NS PRP3 day 422.77±12.47 435.07±10.53*5 day 440.79±11.33 459.98±9.05*7 day 471.25±9.86 497.25±8.12*10 day 498.24±12.85 516.74±14.36** 示與 Control 組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p<0.05，（n=20，M±SD）。

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本文編號(hào)：2732321