【摘要】：研究目的KCNE1L屬于KCNE家族,是鉀離子通道輔助蛋白。以往對其功能的研究主要聚焦在心律失常的相關(guān)性上。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),該基因在特異性皮炎并發(fā)擴散性單純皰疹病毒感染患者的外周血單核淋巴細(xì)胞中表達(dá)顯著減少,這一現(xiàn)象的生物學(xué)意義尚不明確。本課題的研究目的是研究KCNE1L在抗單純皰疹病毒天然免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)中的作用。研究方法通過轉(zhuǎn)染真核表達(dá)質(zhì)粒過表達(dá)KCNE1L和轉(zhuǎn)染短發(fā)夾RNA抑制KCNEIL基因表達(dá),研究KCNE1L對單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV-1)的復(fù)制的影響。我們用實時定量PCR和空斑實驗來檢測HSV-1病毒的復(fù)制。我們還使用了免疫共沉淀檢測KCNE1L與抗病毒天然免疫反應(yīng)信號通路上的重要蛋白的相互作用,并用共聚焦免疫熒光技術(shù)檢測KCNE1L蛋白的細(xì)胞器定位。我們用實時定量PCR和ELISA的方法檢測了IFNα,IFNβ,TNFα和IL-29基因表達(dá)。我們還在293T細(xì)胞中過表達(dá)KCNE1L后,使用不同濃度腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNFα)刺激,用實時定量PCR檢測IL-8細(xì)胞因子的表達(dá)量。研究結(jié)果1、過表達(dá)KCNE1L顯著抑制HSV-1病毒復(fù)制。用shRNA抑制KCNE1L基因表達(dá)后,HSV-1病毒復(fù)制顯著增加。2、過表達(dá)KCNE1L促進HSV-1誘導(dǎo)的IL-29、TNFα的基因表達(dá);而用shRNA抑制KCNE1L基因表達(dá)后,HSV-1誘導(dǎo)的IL-29和TNFα基因表達(dá)量顯著減少。HSV-1誘導(dǎo)的一型干擾素表達(dá)不受KCNE1L的調(diào)節(jié)。3、KCNE1L與IRF7相互作用。KCNE1L增強IRF7誘導(dǎo)的IL-29的基因表達(dá)。4、過表達(dá)KCNE1L增強TNFα(50ng/mL)誘導(dǎo)的IL-8基因表達(dá)。5、KCNE1L定位于線粒體和高爾基體。在TNFα的刺激下,KCNE1L從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到細(xì)胞核定位。研究結(jié)論KCNE1L抑制單純皰疹病毒-1的復(fù)制,調(diào)節(jié)三型干擾素IL-29基因表達(dá)。KCNE1L還參與TNFα誘導(dǎo)的IL-8基因表達(dá),因此可能參與TNFα介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R392
【圖文】：

KCNE1L抑制HSV-1復(fù)制

26圖 3. KCNE1L 與 IRF7 的相互作用及其共定位。A：KCNE1L 與多個病毒相關(guān)重要分子的互作情況；B：KCNE1L 與 IRF7 共定位于細(xì)胞質(zhì)；C：1ug/mL poly(I:C)刺激下 KCNE1L 與 IRF7 共定位于細(xì)胞核。Figure3. The interaction between KCNE1L and IRF7 and their co-localization. A: theinteraction between KCNE1L and several virus-related important molecules. B:

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本文編號：2721843