本文關(guān)鍵詞：無細(xì)胞百日咳組份疫苗脫毒及去脫毒劑工藝研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：百日咳是由百日咳桿菌感染引起的急性傳染病,無細(xì)胞百日咳疫苗是控制百日咳病菌傳播的有效方法。無細(xì)胞百日咳疫苗是通過純化工藝,提取細(xì)菌中具有免疫原性的抗原成分,去除無免疫原性并且引起不良反應(yīng)的毒性物質(zhì)。這些具有高免疫原性的組份包括百日咳毒素(pertussis toxin PT)、絲狀血凝素(filamentous haemagglutinin FHA)、百日咳桿菌黏著素(PRN)。對用柱色譜純化的方法,純化出的三種不同的抗原,用不同的脫毒劑和不同的脫毒方法對三種有效組份百日咳毒素,絲狀血凝素和百日咳桿菌黏著素分別進行脫毒,保留其組份的免疫原性并去除其致病毒性,之后以有效的方法去除對人體有害的脫毒劑,按比例合并,經(jīng)檢測合格,即成本文中所提及的無細(xì)胞百日咳組份疫苗。脫毒是去除百日咳毒素毒性,保留其生物原性的關(guān)鍵步驟,此項研究對生產(chǎn)高效力高安全性的百日咳疫苗具有重要意義。各組分脫毒后去除脫毒劑的效果,影響著組分疫苗的效力和安全性。對無細(xì)胞百日咳組份疫苗生產(chǎn)過程中三種抗原純化液百日咳毒素,絲狀血凝素,百日咳桿菌黏著素各自的不同的脫毒條件的研究,脫毒后的百日咳毒素,絲狀血凝素,百日咳桿菌黏著素純化液進行去脫毒劑方法的研究是本文的主要內(nèi)容。本研究就百日咳毒素純化液,絲狀血凝素純化液,百日咳桿菌黏著素純化液分別用不同方法進行脫毒,檢測脫毒后脫毒液的毒性效果,并對經(jīng)過不同脫毒方法脫毒后的組份進行配比,成百日咳組份疫苗原液后進行全檢。根據(jù)不同檢測結(jié)果,確定三種組分的脫毒方法分別為:百日咳毒素純化液經(jīng)PBS,甘油稀釋后,用戊二醛、天冬氨酸鹽脫毒,為百日咳毒素脫毒液;絲狀血凝素純化液用PBS稀釋后,加甘氨酸、甲醛脫毒,為絲狀血凝素脫毒液;百日咳桿菌黏著素純化液用碳酸鹽緩沖液稀釋后,加入戊二醛、L-賴氨酸脫毒,為百日咳桿菌黏著素脫毒液。本文就脫毒后的純化液進行透析和超濾兩種不同方法的去脫毒劑,之后進行檢測,無菌結(jié)果顯示超濾方法更能保證無菌;戊二醛,甲醛等脫毒劑殘余量,差別不大。且出于人力物力時間成本考慮,超濾都是更優(yōu)選擇。根據(jù)以上脫毒方法進行脫毒,之后用超濾法去除脫毒劑,可行。生產(chǎn)出的無細(xì)胞百日咳組份疫苗合格。
【關(guān)鍵詞】：無細(xì)胞百日咳組份疫苗 脫毒 去脫毒劑
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 注釋說明匯集表9-12
• 第1章 緒論12-22
• 1.1 百日咳簡介12-17
• 1.2 百日咳疫苗17
• 1.3 百日咳疫苗的種類及研究現(xiàn)狀17-20
• 1.3.1 全細(xì)胞百日咳疫苗17-18
• 1.3.2 無細(xì)胞百日咳疫苗18-19
• 1.3.3 基因工程疫苗19-20
• 1.4 組份疫苗研究的目的意義及主要內(nèi)容20-22
• 第2章 實驗22-29
• 2.1 儀器22
• 2.2 試劑與材料22-23
• 2.2.1 試劑溶液22-23
• 2.2.2 菌種23
• 2.3 溶液制備23-24
• 2.4 供試品制備24
• 2.4.1 細(xì)菌培養(yǎng)24
• 2.4.2 粗純24
• 2.4.3 精制24
• 2.5 脫毒24-26
• 2.5.1 百日咳毒素脫毒25
• 2.5.2 絲狀血凝素脫毒25
• 2.5.3 百日咳桿菌黏著素脫毒25-26
• 2.6 透析法去除脫毒劑26
• 2.6.1 透析法去除百日咳毒素脫毒劑26
• 2.6.2 透析法去除絲狀血凝素脫毒劑26
• 2.6.3 透析法去除百日咳桿菌黏著素脫毒劑26
• 2.7 超濾法去除脫毒劑26-27
• 2.7.1 超濾法去除百日咳毒素脫毒劑26-27
• 2.7.2 超濾過程脫毒劑濃度檢測27
• 2.7.3 超濾法去除絲狀血凝素、百日咳桿菌黏著素脫毒劑27
• 2.8 配制吸附無細(xì)胞百日咳疫苗樣品27-29
• 第3章 結(jié)果與討論29-42
• 3.1 脫毒方法29-33
• 3.1.1 百日咳毒素脫毒30-32
• 3.1.2 絲狀血凝素脫毒32-33
• 3.1.3 百日咳桿菌黏著素脫毒33
• 3.2 去脫毒劑方法33-39
• 3.2.1 透析法去脫毒劑34-36
• 3.2.2 超濾法去除脫毒劑36-39
• 3.3 百日咳疫苗樣品的質(zhì)量評價39-42
• 第4章 結(jié)論42-44
• 參考文獻44-48
• 附錄和清單48-62
• 附錄A 無細(xì)胞百日咳（組份）疫苗原液制造及檢定規(guī)程48-54
• 附錄B 無細(xì)胞百白破（組份）B型流感嗜血桿菌聯(lián)合疫苗使用說明書54-57
• 附錄C CHO細(xì)胞檢測活性PT含量方法57-62
• 致謝62

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9 駱鵬;沈立o

本文編號：271793