本文關(guān)鍵詞：用于疫苗輸送的功能化磷酸鈣納米載體的制備及研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：疫苗在預(yù)防人類(lèi)疾病方面有著重要的意義,疫苗佐劑的出現(xiàn)解決了某些疫苗低免疫原性的問(wèn)題,并且為少劑量接種提供了可能,開(kāi)發(fā)更為安全、有效、廣譜的免疫佐劑,是擴(kuò)大疫苗應(yīng)用范圍、研究新型疫苗的重要環(huán)節(jié)。本論文利用免疫活性多糖—甘露聚糖(mannan)為穩(wěn)定劑制備了一種磷酸鈣納米載體,該納米載體在實(shí)現(xiàn)疫苗傳遞的同時(shí)還可作為疫苗佐劑,用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答反應(yīng)。作為抗原傳遞系統(tǒng)該載體為疫苗的新型佐劑研究提供了思路。該課題采用高碘酸鈉(NaIO4)氧化甘露聚糖(mannan, MN)得多醛基氧化甘露聚糖,與帕米膦酸二鈉(Pa)經(jīng)還原胺化反應(yīng),獲得帶有磷酸根的甘露聚糖(Pa-MN),以此產(chǎn)物為穩(wěn)定劑,依靠磷酸根與鈣離子的靜電吸附作用,通過(guò)共沉淀法制備了功能化磷酸鈣(CAP)納米粒。核磁共振、元素分析、與羥基磷灰石的結(jié)合、導(dǎo)電率測(cè)定等實(shí)驗(yàn)證明甘露聚糖-雙磷酸鹽復(fù)合物(Pa-MN)的成功合成,與伴刀豆球蛋白A(ConA)的特異性結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明,合適的修飾度可保持甘露聚糖結(jié)構(gòu)的完整性。通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)粒度儀、掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)表征發(fā)現(xiàn),該功能化納米粒平均粒徑為130.4±1.9nm,且分散性良好。BCA法和SDS-PAGE凝膠電泳用于測(cè)定抗原的裝載量,結(jié)果表明該納米粒對(duì)抗原的包封率為52.1%,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示制備的磷酸鈣納米粒具有良好的細(xì)胞相容性,在細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)中該納米載體可提高細(xì)胞對(duì)抗原的攝取率,Elisa實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠血清中OVA特異性抗體IgG, IgGl,IgG2a水平,結(jié)果顯示該功能化納米粒能顯著提高抗OVA抗體水平,血清中IgG, IgGl,IgG2a水平比傳統(tǒng)鋁佐劑組抗體水平大于1.5倍,表明該載體具有作為免疫佐劑的良好潛力。
【關(guān)鍵詞】：甘露聚糖 磷酸鈣納米載體 疫苗佐劑
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-12
• 第1章 緒論12-25
• 1.1 納米藥物載體13-17
• 1.1.1 納米藥物載體的概述13-14
• 1.1.2 磷酸鈣納米載體概述14
• 1.1.3 磷酸鈣的分類(lèi)14-15
• 1.1.4 磷酸鈣的制備方法15
• 1.1.5 磷酸鈣納米粒的應(yīng)用15-17
• 1.2. 多糖17-20
• 1.2.1 多糖的概述17
• 1.2.2 多糖的結(jié)構(gòu)修飾17-19
• 1.2.3 多糖的應(yīng)用19-20
• 1.3. 疫苗及其佐劑20-23
• 1.3.1 疫苗20-21
• 1.3.2 抗原呈遞細(xì)胞在免疫反應(yīng)中的作用21
• 1.3.3 免疫佐劑21
• 1.3.4 佐劑的分類(lèi)21-23
• 1.4 研究意義及創(chuàng)新點(diǎn)23-25
• 1.4.1 研究意義23-24
• 1.4.2 創(chuàng)新點(diǎn)24-25
• 第2章 納米粒的制備25-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容26-30
• 2.3.1 甘露聚糖(mannan)的結(jié)構(gòu)修飾(Pa-MN的合成)26-28
• 2.3.1.1 實(shí)驗(yàn)原理26
• 2.3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 2.3.2 Pa-MN的結(jié)構(gòu)鑒定(與羥基磷灰石結(jié)合實(shí)驗(yàn))28
• 2.3.3 Pa-MN結(jié)構(gòu)完整性鑒定28-29
• 2.3.4 功能化磷酸鈣納米粒(Pa-MN CAP nanoparticles)的制備29-30
• 2.3.5 納米粒的表征30
• 2.4 結(jié)果與討論30-38
• 2.4.1 氧化甘露聚糖中醛含量30-31
• 2.4.2 Pa-MN中Pa的取代度31
• 2.4.3 Pa-MN的結(jié)構(gòu)鑒定31-32
• 2.4.4 結(jié)構(gòu)完整性分析32-33
• 2.4.5 Pa-MN的定性鑒別33-34
• 2.4.6 不同組份濃度對(duì)磷酸鈣納米載體性能的影響34-37
• 2.4.7 納米粒的表征37-38
• 2.5 本章小結(jié)38-39
• 第3章 抗原的加載及小鼠免疫39-51
• 3.1 實(shí)驗(yàn)試劑39
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器39-40
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法40-44
• 3.3.1 抗原的加載40
• 3.3.2 SDS-PAGE凝膠電泳40-41
• 3.3.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)41-42
• 3.3.4 免疫實(shí)驗(yàn)42-44
• 3.4 結(jié)果與討論44-49
• 3.4.1 OVA包封率44
• 3.4.2 SDS-PAGE凝膠電泳44-45
• 3.4.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)45-46
• 3.4.4 細(xì)胞吸收實(shí)驗(yàn)46-47
• 3.4.5 OVA特異性抗體水平47-49
• 3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析49
• 3.6 本章小結(jié)49-51
• 結(jié)論51-52
• 致謝52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 碩士期間發(fā)表的文章及研究成果60

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本文編號(hào)：270636