本文關(guān)鍵詞：衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的分段克隆表達(dá)及其與沙眼衣原體相互作用的功能區(qū)域初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,CT)是一種較常見(jiàn)性傳播疾病(Sexually transmitted disease,STD)病原體。沙眼衣原體感染后,患者會(huì)出現(xiàn)一系列的臨床癥狀,例如宮頸炎、陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎、非淋菌性尿道炎、前列腺炎、Reiter綜合征、性病性淋巴肉芽腫等[1,2]。若感染沙眼衣原體后不積極治療,則可能導(dǎo)致女性患者出現(xiàn)自然流產(chǎn)、胎膜早破、異位妊娠、早產(chǎn)和輸卵管性不孕等嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。而且長(zhǎng)期、反復(fù)的沙眼衣原體感染可能增加女性患者宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌、艾滋病感染的危險(xiǎn)性[3]。2001年,據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)報(bào)道,世界上每年有新增沙眼衣原體感染病例約9200萬(wàn)例,其中有70%女性患者及50%男性患者為無(wú)癥狀感染者,而實(shí)際的感染者遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出此統(tǒng)計(jì)數(shù)字[4]。美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心(CDC)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示:從2007年-2012年,在青中年人群中沙眼衣原體的感染率達(dá)到1.7%[5]。沙眼衣原體感染已經(jīng)成為美國(guó)最為常見(jiàn)的性傳播疾病,發(fā)病率較高,每年新增感染者大于140萬(wàn)[6]。并且,女性患者發(fā)病率高于男性患者[7]。泌尿生殖道沙眼衣原體感染已經(jīng)成為最常見(jiàn)的性傳播疾病之一。泌尿生殖道沙眼衣原體感染嚴(yán)重的危害了人類(lèi)的健康,如何更好的治療該疾病,已經(jīng)成為了較為重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。近些年來(lái),由于抗生素的濫用,耐藥菌感染率不斷增加,使抗生素在細(xì)菌感染性疾病中的應(yīng)用遇到了瓶頸。臨床中,衣原體的治療也遇到了同樣的難題。而衣原體噬菌體對(duì)衣原體的天然殺傷作用為衣原體感染性疾病的控制及治療提供了良好的發(fā)展前景,可以利用衣原體噬菌體作為一種生物制劑來(lái)治療沙眼衣原體的感染。但在此之前,我們需要進(jìn)一步的確定衣原體噬菌體與衣原體的相互作用區(qū)域,以便更好的了解兩者間的相互作用機(jī)制。衣原體噬菌體具有三種主要結(jié)構(gòu)蛋白,包括Vp1,Vp2和Vp3。Vp1是主要的并且是最大的衣原體噬菌體衣殼蛋白,一些研究顯示Vp1可能是衣原體噬菌體識(shí)別粘附宿主的功能區(qū)域[8,9]。對(duì)Vp1氨基酸序列的分析顯示在其氨基酸序列216-299和462-467間存在兩個(gè)明顯的不同區(qū)域[8]。其中較大的被稱(chēng)為IN5環(huán),研究者預(yù)測(cè)它暴露在病毒表面并在其表面形成蕈樣突起。較小的區(qū)域被稱(chēng)為INS,也考慮是暴露在病毒表面,而且預(yù)測(cè)其與IN5環(huán)位置極為貼近并相互作用[9]。在衣原體噬菌體Vp1序列的差異主要是指區(qū)域:IN5和INS。這表明IN5和INS區(qū)域參與受體的識(shí)別。硅片分析證實(shí)兩個(gè)區(qū)域彼此相鄰,這表明它們?cè)跊Q定不同衣原體噬菌體的宿主范圍和組織嗜性中起主要作用[10]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)衣殼蛋白Vp1對(duì)沙眼衣原體具有抑制其生長(zhǎng)的作用[11],而且作用效果顯著。本研究通過(guò)進(jìn)一步縮小衣原體衣殼蛋白Vp1的表達(dá)片段,來(lái)尋找衣原體噬菌體與衣原體相互作用的功能區(qū)域。[目的]將衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1分段克隆表達(dá),初步確定衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1與沙眼衣原體相互作用的功能區(qū)域。[方法]通過(guò)I-TASSER、PredictProtien等蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)分析網(wǎng)站對(duì)衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的空間結(jié)構(gòu)及其與沙眼衣原體相互作用的功能位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果以及研究背景,將衣殼蛋白Vp1分為不同的部分進(jìn)行表達(dá),通過(guò)TA克隆技術(shù)克隆表達(dá)目的蛋白,通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳及Western-blot免疫印跡技術(shù)對(duì)目的蛋白進(jìn)行鑒定,再通過(guò)氯化鉀膠回收法對(duì)目的蛋白進(jìn)行純化,并進(jìn)行蛋白定量。將目的蛋白分別作用于沙眼衣原體E型標(biāo)準(zhǔn)株,觀察并分析衣殼蛋白Vp1全長(zhǎng)及兩個(gè)蛋白片段分別對(duì)沙眼衣原體E型標(biāo)準(zhǔn)株的抑制作用,并進(jìn)行比較分析。[結(jié)果]根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果及相關(guān)背景資料將衣殼蛋白Vp1分為Vp11-189和Vp1190-502兩部分,目的蛋白Vp11-189和Vp1190-502的基因序列長(zhǎng)度分別為567bp和939bp,通過(guò)SDS-PAGE以及Western-blot鑒定結(jié)果顯示蛋白Vp11-189和Vp1190-502的相對(duì)分子質(zhì)量分別為20KD和35KD,并且獲得了純化的蛋白Vp11-189和Vp1190-502。同時(shí),體外干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示蛋白Vp11-189、Vp1190-502及Vp1對(duì)沙眼衣原體均有抑制作用,且抑制率分別為43.95%、81.74%和78.02%。[結(jié)論]成功將phiCPG1衣殼蛋白Vp1分為Vp11-189、Vp1190-502兩部分進(jìn)行表達(dá),通過(guò)體外干預(yù)實(shí)驗(yàn)證明,蛋白Vp1190-502與衣殼蛋白Vp1對(duì)沙眼衣原體E型標(biāo)準(zhǔn)株具有相似的抑制作用,并且作用效果顯著。蛋白Vp1的190-502氨基酸片段對(duì)沙眼衣原體生長(zhǎng)有更為明顯的抑制作用,這為后期的深入研究提供了一定的參考價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：衣原體噬菌體 phiCPG1 Vp1 蛋白 功能區(qū)域
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R374.1
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-18
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-18
• 一、衣殼蛋白Vp1空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及其分段克隆表達(dá)、鑒定及純化18-45
• 1.1 對(duì)象與方法18-30
• 1.1.1 模板、載體、細(xì)胞株、菌株18
• 1.1.2 試劑及相關(guān)液體配制18-21
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材21
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法21-30
• 1.2 結(jié)果30-41
• 1.2.1 衣殼蛋白Vp1的空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)30-33
• 1.2.2 蛋白Vp1_(1-189)、Vp1_(190-502)基因克隆鑒定結(jié)果33-37
• 1.2.3 蛋白Vp1_(1-189)、Vp1_(190-502)的表達(dá)、純化及鑒定37-39
• 1.2.4 衣殼蛋白Vp1表達(dá)、純化及鑒定39-41
• 1.3 討論41-44
• 1.3.1 衣殼蛋白Vp1空間結(jié)構(gòu)及結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)43
• 1.3.2 蛋白Vp1_(1-189)、Vp1_(190-502)的TA克隆43-44
• 1.4 小結(jié)44-45
• 二、衣殼蛋白Vp1及Vp1_(1-189)及Vp1_(190-502)對(duì)沙眼衣原體的作用檢測(cè)45-58
• 2.1 對(duì)象與方法45-52
• 2.1.1 細(xì)胞株、沙眼衣原體株45
• 2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑及相關(guān)液體配制45-46
• 2.1.3 儀器及耗材46
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法46-52
• 2.2 結(jié)果52-54
• 2.2.1 Vp1蛋白對(duì)沙眼衣原體最適作用濃52-53
• 2.2.2 Vp1蛋白對(duì)沙眼衣原體的作用結(jié)果53
• 2.2.3 Vp1、Vp1_(1-189)及Vp1190-502蛋白對(duì)沙眼衣原體的抑制作用比較53-54
• 2.3 討論54-57
• 2.3.1 噬菌體的生命周期及其對(duì)宿主的影響54-55
• 2.3.2 噬菌體衣殼蛋白對(duì)衣原體的抑制作用55-57
• 2.4 小結(jié)57-58
• 結(jié)論58
• 論文創(chuàng)新點(diǎn)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 發(fā)表論文及參加科研情況說(shuō)明63-64
• 綜述 衣原體噬菌體及其與宿主細(xì)胞結(jié)合機(jī)制的相關(guān)研究64-74
• 綜述參考文獻(xiàn)71-74
• 致謝74-75
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷75

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周斌;劉珂;陳溥言;;豬瘟病毒衣殼蛋白靶向核酸酶表達(dá)系統(tǒng)的建立及鑒定[J];病毒學(xué)報(bào);2008年06期

2 劉麗萍;HIV病毒組裝信息[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊(cè);2003年05期

3 漆輝洲;鐘慧;;諾如病毒衣殼蛋白在酵母細(xì)胞中的表達(dá)研究[J];社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志;2014年13期

4 毛子旭,柴少愛(ài),毛江森,陳念良,余佩華,黃海鷹,楊能宇,謝汝英;甲型肝炎病毒衣殼蛋白SDS—PAGE免疫分析[J];病毒學(xué)報(bào);1987年01期

5 徐雨;賈仁勇;;圓環(huán)病毒Cap基因及其編碼的衣殼蛋白研究進(jìn)展[J];病毒學(xué)報(bào);2013年04期

6 張奇亞,肖楓,李正秋,桂建芳;從我國(guó)分離的3株蛙虹彩病毒與FV3主要衣殼蛋白基因同源性的比較[J];病毒學(xué)報(bào);2002年01期

7 李鳳云;;戊型肝炎病毒緬甸株及中國(guó)株編碼衣殼蛋白核酸序列的比較[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1993年03期

8 聶廣;;戊型肝炎病毒緬甸株及中國(guó)株編碼衣殼蛋白核酸序列的比較[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;1993年03期

9 李敏;馬蘭芝;白杰英;劉一;趙彥斌;王洪寶;丁璐靜;武文卿;孫兆增;曾林;;猴免疫缺陷病毒衣殼蛋白p27在大腸桿菌中的表達(dá)及純化[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

10 吳冰珊;嚴(yán)延生;;諾如病毒衣殼蛋白表達(dá)的研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年07期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張曉丹;呂茂民;吳健敏;章金剛;;豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒衣殼蛋白基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建與單克隆抗體制備[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第四次會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2005年

2 宋勤葉;楊漢春;郭鑫;陳艷紅;查振林;;表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白的重組質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)[A];第一屆中國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

3 李洋;金寧一;韓松;李霄;金苗苗;楊堯;;Ⅱ型豬圓環(huán)病毒長(zhǎng)春株衣殼蛋白基因的克隆及原核表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 相琪旺;姜世金;鄒金峰;孫亞妮;王鑫;高繼明;謝之景;王玉;;鴨圓環(huán)病毒衣殼蛋白核定位信號(hào)的確定及部分功能[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

5 周斌;劉珂;陳溥言;;豬瘟病毒衣殼蛋白靶向核酸酶表達(dá)系統(tǒng)的建立及鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 楊銘;何山杉;李介博;袁德凱;;HIV-1衣殼蛋白結(jié)構(gòu)與功能及其作為新靶標(biāo)的抑制劑的研究[A];2006年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

7 王延樹(shù);向華;鄭翠玲;嚴(yán)悌昆;宣華;;貓杯狀病毒衣殼蛋白多表位抗原的原核表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

8 羅軍榮;斯日古楞;劉霄卉;周建華;馬學(xué)恩;;JSRV衣殼蛋白單克隆抗體識(shí)別表位的篩選[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

9 侯薔;袁道莉;毛亞萍;孫佳增;王爽;李智麗;劉維全;;水貂腸炎病毒衣殼蛋白VP2的功能研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

10 趙玉然;薛長(zhǎng)湖;;諾如病毒的原核表達(dá)與抗血清的制備[A];2007年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨水產(chǎn)微生態(tài)調(diào)控技術(shù)論壇論文摘要匯編[C];2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 張磊;黑胸大蠊?jié)夂瞬《疽職さ鞍椎谋磉_(dá)與定位研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 尹雙輝;豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白病毒樣顆粒的制備及其免疫原性的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

3 宋勤葉;表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型衣殼蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建及免疫效應(yīng)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 帥江冰;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白核定位信號(hào)對(duì)其復(fù)制的影響及突變體病毒的免疫原性研究[D];浙江大學(xué);2008年

5 嚴(yán)維巍;兔出血癥病毒中國(guó)株衣殼蛋白基因的表達(dá)及其免疫原性初探[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

6 孫健;人乳頭瘤病毒衣殼蛋白特異性多肽與細(xì)胞受體的結(jié)合機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

7 金石;人乳頭瘤病毒（HPV）衣殼蛋白L1的體外可控組裝[D];吉林大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李揚(yáng)帆;藍(lán)舌病病毒1型衣殼蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)及競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 宗乾坤;Ⅱ型草魚(yú)呼腸孤病毒外衣殼蛋白的免疫原性及其相互作用宿主蛋白的初步研究[D];上海海洋大學(xué);2016年

3 周全;衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的分段克隆表達(dá)及其與沙眼衣原體相互作用的功能區(qū)域初探[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李艷麗;嵌合口蹄疫病毒中和表位的豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白表達(dá)與免疫原性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

5 陳長(zhǎng)春;豬圓環(huán)病毒衣殼蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

6 朱金梅;兔出血癥病毒復(fù)制子的構(gòu)建及其衣殼蛋白基因遺傳變異分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

7 章萍萍;人類(lèi)腸道病毒71型衣殼蛋白全基因成和原核表達(dá)分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

8 王亞楠;大菱鲆紅體病虹彩病毒主要衣殼蛋白與宿主蛋白的相互作用研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2008年

9 馬靜;小衣殼蛋白pⅨ對(duì)3型牛腺病毒包裝作用的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

10 薛念波;偽狂犬病毒Ea株主要衣殼蛋白之間的相互作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的分段克隆表達(dá)及其與沙眼衣原體相互作用的功能區(qū)域初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：270597